Что такое квм при исследовании впч

ПЦР-анализ: диагностика ВПЧ методом полимеразно-цепной реакции

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – ДНК содержащий вирус, разные типы которого вызывают новообразования на теле, лице, руках и ногах, на слизистой оболочке полости рта, гортани, на половых органах. ВПЧ группы высокого канцерогенного риска приводит к неоплазии эпителия половых органов и значительно увеличивает риск развития рака шейки матки, влагалища, вульвы, полового органа, анальной области.

Согласно данным статистики, в мире ежегодно умирает от рака шейки матки 250 тыс. женщин. Дисплазия и начальные стадии онкологии не отражаются на самочувствии.

Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяют ДНК возбудителя в образце. Совместное использование цитологического скрининга и анализа ПЦР ВПЧ, увеличивает вероятность выявления фоновых предраковых состояний и рака шейки матки до 99%. У пациенток с цервикальным раком в 92% случаев выявлены высокоонкогенные типы папилломавируса. После того как была доказана его определяющая роль в развитии этой патологии, ранней диагностике инфицирования ВПЧ стали придавать особое значение.

Общие сведения о методе

Полимеразная цепная реакция: что это такое? ПЦР — молекулярно-биологический метод, позволяющий определить минимальное содержание определённого фрагмента ДНК в биологическом материале, путём многократного копирования. Так получается количество, достаточное для исследования.

Метод был изобретён в 1983 году американским учёным Кэрри Муллисом, который впоследствии получил за него Нобелевскую премию. ПЦР широко используется для различных целей:

• диагностика вирусных и бактериальных инфекций (в том числе и ВПЧ);
• криминалистика (сравнение материала с места преступления с образцами подозреваемого);
• установление отцовства, идентификация личности;
• исследования в области генетики, биологии, фармации, медицины.

Главные плюсы метода:

• высокая информативность;
• небольшое количество материала для исследования.

Для проведения ПЦР может использоваться любой биологический материл: кровь, моча, семенная жидкость, плевральная жидкость, мазки со слизистых оболочек.

Для диагностики вируса папилломы человека у женщин на анализ берут соскоб из канала шейки матки, у мужчин – из уретры.

Для выполнения анализа необходим специальный аппарат – амплификатор. В него помещают образец биоматериала. Нагревают, затем охлаждают и добавляют специальный компонент, который связывается со строго определённым участком ДНК вируса (если он присутствует в материале). Происходит копирование заданного фрагмента.

Затем цикл многократно повторяется по цепочке. Через несколько часов количество ДНК значительно увеличивается и становится достаточным для дальнейшей работы. Общая продолжительность исследования – 1-2 суток.

Когда нужен этот анализ

Показаниями к направлению на исследование ПЦР являются:

• скрининговая программа обследования женщин после 25 лет или через 3 года от начала половой жизни (в США и странах Европы принята на государственном уровне) для определения группы риска по цервикальному раку;
• обследование женщин, которым тест на цитологический скрининг выполнялся более, чем 3 года назад;
• неоплазия, выявленная с помощью цитологического скрининга;
• сомнительный мазок на цитологию;
• контроль спустя полгода после лечения неоплазии тяжёлой степени;
• выявленный ранее положительный результат ПЦР на ВПЧ высокого риска онкологии (оптимально через год);
• дифференциальная диагностика генитальных новообразований (используется у женщин и мужчин);
• в рамках наблюдения за женщинами, ранее перенёсшими цервикальный рак;
• диагностика ВПЧ инфекции до беременности.

Подготовка к обследованию

Соблюдение рекомендаций по подготовке к обследованию на папилломавирус необходимо для получения достоверного результата.

1. Анализ ВПЧ ПЦР методом проводят не ранее, чем через месяц после окончания курса антибиотиков (внутрь или инъекционно) и спустя 2 недели после местного лечения (мази, вагинальные свечи).
2. У женщин анализ проводят не ранее, чем через 5 дней после окончания месячных, предпочтительно в первой половине цикла.
3. После процедуры кольпоскопии и УЗИ с вагинальным датчиком сдавать анализ разрешается только через двое суток.
4. За двое суток до исследования исключаются спринцевания и половые контакты.
5. Накануне вечером и утром в день исследования запрещены гигиенические процедуры.
6. Мужчинам за 2 часа до взятия анализа не мочиться, так как попадание мочевины в образец может привести к ложноположительному результату.

Процедура взятия биоматериала

От качества забора материала зависит результат анализа. При нарушении стерильности, при попадании в биоматериал посторонних веществ или при недостаточном количестве эпителиальных клеток, взятых для исследования, показатели будут недостоверными.

У женщин вначале шейку матки обрабатывают стерильным физиологическим раствором. Соскоб делают специальной щёточкой или зондом. Вводят зонд в канал шейки матки примерно на 1 см, затем около 3 секунд аккуратно вращают, извлекают, исключая контакт со стенками влагалища, помещают в приготовленную пробирку со средой на 10-15 секунд, также осторожно вращают, отжимают об стенки пробирки, извлекают, пробирку закрывают.

Мужчинам процедуру проводят по аналогии. Головку пениса и отверстие мочеиспускательного канала протирают тампоном с физиологическим раствором, зонд вставляют на 3-4 см в уретру, вращают, извлекают, помещают в пробирку со средой. Материал может храниться при комнатной температуре до двух суток.

Показатель КВМ (контроль взятия материала) в бланке анализа указывает, насколько правильно был взят материал для исследования, достаточно ли в образце эпителиальных клеток. Минимальное допустимое значение КВМ – 4 ед. При показателе ниже 4 анализ не может считаться достоверным и его следует пересдать.

Виды методик

В анализе ПЦР применяют четыре типа методик определения вируса папилломы.

Качественный способ

Это выявление ВПЧ ВКР (высокого канцерогенного риска) без установления типа возбудителя. Используется в качестве скрининга совместно с другими методами обследования. Указывает только на сам факт инфицирования одним или несколькими типами ВПЧ. Есть анализы с разным количеством генотипов (от 14 до 21).

Оценка результатов:

• «обнаружено» — в образце содержится ДНК вируса одного или нескольких типов из указанных;
• «не обнаружено» — в образце ДНК ВПЧ указанных типов отсутствуют.

Генотипирование

Методика позволяет определить тип ВПЧ ВКР. Это имеет значение для прогноза, так как ВПЧ типа 16 и 18 вызывают неоплазию эпителия и онкологические заболевания чаще других, что делает прогноз более серьёзным. При их выявлении необходимо выполнить кольпоскопию. При инфицировании другими типами сначала делают мазок на цитологию.

Генотипирование используют, если необходимо отличить персистирование вируса от повторного заражения. Если спустя год после положительного анализа выявляется тот же тип вируса, значит, он остался в организме. Если выявлен уже другой тип — значит, произошло повторное инфицирование.

Нередко бывает, что у мужа и жены определяются разные генотипы вирусов, что бывает причиной ссор и подозрений в неверности. Однако такая ситуация связана с разной скоростью освобождения организма от вируса.

Оценка результатов:

• даётся ответ по каждому типу вируса: «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированные методики

Качественное определение ВПЧ ВКР с генотипированием 16 типа.

Оценка результатов:

• «не обнаружено» — ДНК вирусов указанных типов отсутствует;
• « обнаружено, в том числе ВПЧ 16 типа» — присутствует 16-й тип + один или несколько других из указанных;
• «обнаружено 16 тип ВПЧ» — из всех указанных вирусов присутствует только 16 тип;

Количественное определение без генотипирования

Это определение количества вирусов канцерогенной группы в исследуемом материале. Используется для определения тяжести инфекции, прогноза, подбора оптимальной схемы лечения и оценки его результата. Есть анализы с количественным определением только 16 и 18 типов ВПЧ.

Оценка результатов (ВПЧ на 100 тыс. клеток):

• менее 3 — малозначимая концентрация вируса;
• 3-5 — клинически значимое содержание возбудителя, возможность неоплазии или риск её развития;
• более 5 — повышенное содержание вируса, высокая вероятность неоплазии эпителия и рака шейки матки.

Обследование перед беременностью

До беременности желательно пройти обследование на ВПЧ, так как впоследствии из-за гормональных изменений возможен переход латентного течения инфекции в клиническое. Возможности лечения во время беременности сильно ограничены.

Во время родов есть вероятность заражения малыша. 6 и 11 типы ВПЧ могут привести к развитию у новорождённого папилломатоза гортани.

Поэтому сделанный вовремя анализ ПЦР избавит от многих проблем. При обнаружении инфекции необходимо заранее провести лечение: удаление кондилом плюс противовирусная терапия.

Где пройти обследование

ПЦР – сложный в исполнении анализ, для его проведения необходимо дорогостоящее оборудование, реактивы и квалифицированный персонал. Поэтому сделать его можно только в специальных коммерческих лабораториях (INVITRO, HELIX), где есть необходимые условия для выполнения. Стоимость разных модификаций ПЦР составляет от 900 до 2,5 тыс. рублей.

Дополнительно 300-400 рублей придётся заплатить за забор биоматериала на анализ. Некоторые люди, желая сэкономить, берут пробирку со средой в коммерческой лаборатории, а материал на исследование идут сдавать в процедурный кабинет женской консультации. Однако в этом случае лаборатория не берёт на себя ответственность за недостоверный результат из-за возможного нарушения техники выполнения соскоба.

Тактика ведения женщин в зависимости от результатов обследования

В 90% случаев организм справляется с вирусом самостоятельно за полтора-два года (естественная элиминация), но с возрастом способность к самоочищению уменьшается. У 15% человек с положительным анализом ПЦР в течение 2 лет развивается неоплазия эпителия шейки матки.

1. ПЦР отрицательный, цитология отрицательная — в специальном наблюдении не нуждается, рекомендовано ежегодное посещение гинеколога и мазок на цитологию.
2. ПЦР положительный, результат цитологии в норме — явка к врачу через полгода, повторный анализ на цитологию и ВПЧ.
3. ПЦР отрицательный, по результатам цитологии — начальные признаки дисплазии эпителия — наблюдение, повторный мазок на цитологию через полгода.
4. ПЦР положительный в сочетании с найденными атипичными клетками в мазке — кольпоскопия.

ПЦР — высокоточный и чувствительный метод. Неправильные результаты анализа практически всегда бывают связаны с дефектами забора материала.

ВКР скрининг имеет большое значение в комплексной диагностике папилломавирусной инфекции, выявлении ранних стадий дисплазии и рака шейки матки, определении групп риска по онкологии.