Впч пап тест жидкостный инвитро
Скрининговый тест, использующийся в целях диагностики предраковых состояний и рака шейки матки.
Существует более 100 генотипов вируса папилломы человека. Инфицирование этим вирусом – достаточно распространённое явление. Передаётся инфекция обычно половым путём, в редких случаях возможна вертикальная передача вируса от матери к ребёнку во время родов.
Инфицирование вирусом папилломы может не иметь клинических проявлений, часто наблюдается естественное очищение организма от вируса, особенно в молодом возрасте. Но персистенция вируса в эпителии шейки матки в течение длительного времени может вызывать его патологические изменения.
Рак шейки матки – один из немногих видов злокачественных новообразований, для которых установлена основная причина возникновения заболевания. Многочисленными исследованиями показано, что ДНК вируса папилломы человека обнаруживается практически при всех случаях предраковых состояний и при раке шейки матки. Инфицирование вирусом папилломы предшествует последующей сквамозной (чешуйчатой) интраэпителиальной дисплазии шейки матки. Третья стадия интраэпителиального новообразования шейки матки возникает только при наличии персистирующей инфекции генотипами папилломавируса высокого онкогенного риска. Доказано, что длительная персистенция (5 – 10 лет) папилломавируса генотипов высокого онкогенного риска у женщин старше 30 лет связана со значительным ростом риска развития злокачественных изменений шейки матки. Инфицирование вирусом папилломы генотипов низкого онкогенного риска может клинически проявляться в виде появления остроконечных кондилом.
Digene HPV тест – защищённая международным патентным законодательством молекулярная технология фирмы Digene, направленная на выявление специфических фрагментов ДНК вируса папилломы человека (метод «гибридного захвата»).
Digene HPV тест дает возможность дифференцировать между 2 группами генотипов вируса – высокого и низкого онкориска. В тесте № 394 выявляется наличие ДНК HPV группы генотипов высокого риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68). В тесте № 395 выявляется наличие ДНК HPV группы генотипов низкого риска (6/11/42/43/44).
Digene HPV тест получил широкое распространение благодаря своей надежности и простоте применения. Чувствительность теста в комбинации с цитологическим исследованием (PAP-тест, в лаборатории ИНВИТРО тест № 517) в обнаружении предраковых изменений шейки матки и рака шейки матки намного выше, чем проведение только цитологического исследования. Считается целесообразным проведение Digene HPV теста при неопределённых результатах PAP-теста. В настоящее время комбинация Digene HPV теста и цитологического PAP-теста становится «золотым стандартом» в этой области диагностики и предлагается для скринингового обследования женщин старше 30 лет. Метод стандартизован. Это единственный тест выявления HPV высокого онкогенного риска, одобренный FDA (Федеральное Управление США по контролю за пищевыми продуктами и лекарствами). Тест получил одобрение ФСНСЗСР (Федеральная служба РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития).
Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, приводящий к развитию неоплазии шейки матки (в отличие от обычных ПЦР-методов, направленных на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, что не всегда имеет прямые клинические корреляции). Положительный Digene HPV тест у женщин моложе 30 лет служит показанием к повторному тестированию через 9 месяцев, поскольку у молодых женщин инфекция ВПЧ может носить транзиторный характер.
Положительный Digene HPV тест у женщин старше 30 лет может свидетельствовать о персистенции вируса. При соответствующем результате цитологического исследования это означает, что женщина имеет высокий риск развития онкопатологии шейки матки и ей требуется специальная профилактика или лечение. Современные методы лечения позволяют в случае раннего выявления резко снизить заболеваемость раком шейки матки и особенно его инкурабельных случаев. Тестирование на присутствие вируса после проведённого лечения позволяет убедиться в его эффективности.
Вирус папилломы человека: вопросы и ответы
Что такое папилломавирусная инфекция?
Папилломавирусная инфекция – группа вирусных инфекционных заболеваний, характеризующихся развитием папилломатозных (бородавчатых) образований на коже и слизистых оболочках, хроническим рецидивирующим течением, широким распространением, высокой контагиозностью, т.е. способностью легко передаваться от человека к человеку.
Проявления папилломавирусной инфекции (ПВИ, ВПЧ) медикам известны давно. Они описаны еще врачами Древней Греции под названием «кондиломы». Гиппократ называл их также «половыми бородавками».
Вирус папилломы человека (ВПЧ) – это достаточно распространенный вирус, который может вызвать серьезные заболевания вплоть до возникновения онкологических заболеваний.
По эпидемиологическим оценкам в мире инфицировано 10-13% населения или приблизительно 630 млн. человек. При проведении массовых скрининговых исследований ВПЧ обнаруживается у 40-50% сексуально активных мужчин и женщин, но у большинства из них, особенно в молодом возрасте, может исчезнуть без какого- либо лечения.
Как можно заразиться вирусом папилломы человека?
ВПЧ поражает всех – мужчин и женщин – и передается при половых контактах, а также при любых прямых контактах с кожей заражённого человека, однако очень редко метастазирует в отдельные органы и ткани человека.
Не случайно вирус папилломы человека – наиболее сексуально трансмиссивная инфекция. По данным некоторых исследователей, вероятность заражения ВПЧ при половом контакте составляет до 60-70%, частота инфицирования вирусом прямо пропорциональна числу половых партнёров: при наличии одного партнера ВПЧ выявляется у 17-20% женщин, при наличии 5 и более партнёров – у 70-80%.
Клинические формы папилломавирусной инфекции обнаруживают у 40-60% мужчин, являющихся половыми партнёрами инфицированных женщин. Поражения у них вызываются теми же типами ВПЧ, что и у женщин, а примерно в 2/3 случаев возникают характерные высыпания на коже и слизистых оболочках половых органов.
Несмотря на то, что вирус папилломы человека обнаружен в амниотической жидкости, риск заражения плода от матери оценивается как низкий и составляет – до 3%.
К каким заболеваниям может привести наличие у человека вируса папилломы?
На сегодняшний день известно более 300 различных типов вируса папилломы человека. Среди них различают типы ВПЧ высокого, среднего и низкого онкогенного риска. При этом человек может быть инфицирован как одним, так и несколькими типами вируса одновременно.
Различные типы ВПЧ вызывают или принимают участие в развитии:
цервикальной, вульвальной, влагалищной дисплазии шейки матки;
преинвазивного и инвазивного рака шейки матки, рака влагалища и перианальной области;
остроконечных кондилом половых органов, мочевых путей;
генитальных кондилом.
Согласно данным эпидемиологических исследований, частота ПВИ гениталий значительно варьирует в различных этнических и географических регионах. Распространённость вируса папилломы обусловлена многочисленными факторами, а также во многом определяется социально-экономическими, поведенческими и медико-гигиеническими условиями. Так, например, минимальная частота инфицирования ВПЧ (5%) наблюдается в Испании. Эта страна принадлежит к странам с «низким» риском заболевания раком шейки матки. Традиционно «высоким» риском инфицирования ВПЧ считаются страны – Аргентина, Мексика, Бразилия, Марокко. С другой стороны, в США и Канаде, несмотря на высокий социально- экономический уровень, частота выявления ВПЧ составляет от 22 до 26%.
Несмотря на очевидную медико-социальную значимость проблемы, системные исследования по оценке распространенности ПВИ в Российской Федерации практически не проводились. В настоящее время выполняются отдельные, нескоординированные исследования, согласно которым невозможно объективно оценить состояние проблемы в целом и осуществить даже приближённое прогнозирование эпидемиологической ситуации распространенности ВПЧ среди населения.
Как развивается и проявляется папилломавирусная инфекция?
Вирус папилломы человека обитает в коже и слизистых оболочках половых органов. Как показывают медицинские и лабораторные исследования, количество вируса зависит от состояния иммунитета кожи и слизистых – чем выше активность иммунной системы, тем меньшее количество вируса содержится в них. Для того, чтобы вирус мог проявить себя какими-либо симптомами, должно накопиться определенное его количество. А это возможно только при условии снижения иммунитета: после перенесённых инфекций, во время (после) приёма антибиотиков, при беременности, во время сильных стрессов и т. д. Накопившись в достаточной мере на участке кожи или слизистой, вирус папилломы изменяет функцию эпителиальных клеток. В результате они начинают бесконтрольно делиться, что приводит к разрастанию участка кожи и появлению разного рода образований – папиллом и кондилом.
В зависимости от проявлений ПВИ на гениталиях выделяют клиническую, субклиническую и латентную формы.
Клиническая форма инфекции – это в основном генитальные бородавки в виде остроконечных (экзофитных) образований. В редких случаях кондиломы наружных половых органов быстро разрастаются, превращаясь в полузлокачественное гигантское образование – опухоль Бушке – Левеншштейна, с экзо- и эндофитным ростом и способностью к проникновению в соседние ткани.
Субклиническая форма ПВИ проявляется в виде плоских кондилом. Они чаще локализуются на шейке матки, реже во влагалище, и в большинстве случаев не заметны при осмотре.
Латентная форма ПВИ не сопровождается морфологическими изменениями в инфицированной ткани, а ДНК вируса часто определяют, где нет заметных клинических признаков инфекции.
Как диагностировать наличие вируса папилломы человека?
Доказательством наличия вируса папилломы служат:
проявления инфекции ВПЧ;
результаты цитологического исследования (изучения характера клеток под микроскопом), свидетельствующего о дисплазии шейки матки;
выявление ВПЧ методом ПЦР;
выявление в крови антител к ВПЧ (используется только в научных целях).
В лабораторной практике для диагностики ВПЧ используются две методики: ПЦР и гибридизационный анализ (Дайджин – тест). В Независимой лаборатории ИНВИТРО для диагностики вируса папилломы человека используют оба метода.
Наиболее распространенным, доступным и достаточно чувствительным является метод ПЦР. Он позволяет диагностировать субклиническую и латентную формы инфекции и обнаружить от 10 до 100 копий генома ВПЧ и идентифицировать, по крайней мере, 43 различных типа.
Несмотря на высокую чувствительность ПЦР, при бессимптомной инфекции ВПЧ выявить вирус удается далеко не всегда. Это связано с особенностями этой инфекции:
инфекция ВПЧ может неопределенное время находиться в латентном (спящем) состоянии. При этом вирус находится в глубине кожи и слизистых, но на поверхность не выделяется. В таком состоянии его сложно выявить методом ПЦР.
инфекция ВПЧ в большинстве случаев поражает обширные участки кожи. При отсутствии симптомов не совсем ясно, исследование какого участка кожи будет более достоверным.
Дайджин – тест – позволяет выявлять не только 13 типов вируса высокоонкогенного риска и 5 типов низкого онкогенного риска ВПЧ, но и определять клинически значимую концентрацию вируса в ткани. Это помогает выработать дальнейшую тактику врача при ведении пациента. Чувствительность теста в сочетании с цитологическим исследованием в обнаружении дисплазий и рака шейки матки намного выше, чем проведение только цитологического анализа.
При цитологическом исследовании, которое также можно провести в Независимой лаборатории ИНВИТРО, часто используется окрашивание мазков по Папаниколау (PAP – тест).
В настоящее время комбинация Дайджин – теста и PAP –теста является «золотым стандартом» в области диагностики патологии шейки матки и предлагается для скринингового обследования женщин старше 30 лет. Положительный тест у женщин моложе 30 лет служит показанием к повторному тестированию через 9 месяцев, поскольку у молодых инфекция может носить транзиторный характер.
Положительный Дайджин – тест у женщин, старше 30 лет может свидетельствовать о персистенции вируса. При соответствующем результате цитологического исследования это означает, что имеется высокий риск развития онкопатологии шейки матки и это требует специальной профилактики и лечения.
Следует помнить, что диагностика ВПЧ инфекции – является одним из важных методов профилактики рака шейки матки и играет значительную роль в успешном лечении данного заболевания.
Однако выявление папилломавирусных инфекций требует современной технологической базы и высококачественных исследований. Именно это может предложить своим клиентам Независимая лаборатория ИНВИТРО.
Источник
Метод исследования: ПЦР, цитологическое исследование.
Включает в себя два исследования: ВПЧ-расширенный и ПАП-тест (цитологическое исследование). ВПЧ-расширенный позволяет выявить и определить тип ВПЧ высокого онкогенного риска и концентрацию (вирусную нагрузку). Также проводится цитологическое исследование цервикального соскоба, взятого во флакон с транспортной средой для жидкостной цитологии (окраска по Папаниколау) с целью выявления патологии шейки матки. Цитологическое исследование по Папаниколау (ПАП-тест) – это исследование, направленное на выявление онкопатологии шейки матки (дисплазия различной степени тяжести, наличие атипичных клеток). В отличие от стандартного цитологического исследования, где результат исследования носит описательный характер, результат «ВПЧ-ПАП-тест» формализован в соответствие с терминологической системой Бетезда (2001 г.). По результатам исследований даются рекомендации в соответствии с алгоритмом скрининга на выявление патологии шейки матки.
ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:
- Скрининговые исследования на выявление онкопатологии шейки матки
- Контроль состояния шейки матки после лечения
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Референсные значения (вариант нормы):
Пример результата исследования – ОБНАРУЖЕНО
| Параметр | Результат | Референсные значения | Ед.Изм. |
|---|---|---|---|
| ВПЧ-тест | |||
| Количество клеток в образце (параметр используется для клининической интерпретации) | более 500 | Более 500 | |
| ДНК ВПЧ высокого риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 типы) | ОБНАРУЖЕНО | Не обнаружено | |
| ДНК ВПЧ группы A9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) | 5,0 | <3.0 (количество малозначимое) | lg ДНК на 10^5 клеток |
| ДНК ВПЧ группы A7 (18, 39, 45, 59, 68 типы) | 2,0 | <3.0 (количество малозначимое) | lg ДНК на 10^5 клеток |
| ДНК ВПЧ группы A5/A6 (51, 56 типы) | 0,0 | <3.0 (количество малозначимое) | lg ДНК на 10^5 клеток |
| ДНК ВПЧ 16 типа | 0,0 | <3.0 (количество малозначимое) | lg ДНК на 10^5 клеток |
| ДНК ВПЧ 18 типа | 0,0 | <3.0 (количество малозначимое) | lg ДНК на 10^5 клеток |
| Генотипы ВПЧ высокого риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 типы) | 31, 59 | ||
| Ведущие генотипы ВПЧ | 31 |
Пример результата исследования – Не обнаружено
| Параметр | Результат | Референсные значения | Ед.Изм. |
|---|---|---|---|
| ВПЧ-тест | |||
| Адекватность образца (количество клеток в образце | более 500 | Более 500 | |
| ДНК ВПЧ высокого риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 типы) | Не обнаружено | Не обнаружено |
Пример цитологическогот исследования:
| Параметр | Результат | |
|---|---|---|
| ПАП-тест | ||
| Адекватность цитологического образца | Адекватный | |
| Клетки зоны трансформации | Отсутствует | |
| Признаки воспаления | Отсутствует | |
| Цитологическое заключение по терминологической системе Бетесда (The Bethesda System – TBS) | ||
| Рекомендации по результатам ВПЧ-ПАП-теста/ВПЧ-теста/ПАП-теста согласно алгоритму скрининга * | ||
Расшифровка аббревиатур Терминологической системы Бетесда, 2001, 2014 | ||
Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.
Источник
Метод определения
Жидкостная цитология технология ThinPrep®.
Исследуемый материал
мазок эпителия слизистой шейки матки и цервикального канала
Жидкостная цитология ThinPrep® – стандарт проведения цитологического исследования биоматериала из шейки матки.
Рак шейки матки (РШМ) – второй по распространенности тип рака среди женского населения, от которого ежегодно умирает более 250 000 женщин во всем мире. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, в течение 10 ближайших лет смертность от рака шейки матки может возрасти на 25%.
Процесс развития РШМ длительный. Период от интраэпителиального поражения клеток низкой степени (LSIL – low grade squamous intraepithelial lesion), интраэпителиального поражения клеток высокой степени (HSIL– high grade squamous intraepithelial lesion) до инвазивного рака шейки может составить 10-15 лет. Это означает, что у женщин достаточно времени для проведения соответствующих профилактических мероприятий, препятствующих развитию инвазивного РШМ.
Для выявления предраковых изменений, которые при отсутствии лечения могут привести к развитию рака, проводится цитологический скрининг рака шейки матки: тестирование всех женщин, у большинства из которых симптомы не проявляются (цитологическое исследование биоматериала шейки матки, окрашивание по Папаниколау, Рар-тест).
Жидкостная цитология – это стандартизированная технология приготовления цитологического препарата. Сегодня она признана наиболее информативным способом получения биологического материала и рекомендована в качестве «золотого стандарта» диагностики интраэпителиальных неоплазий слизистой цервикального канала и влагалищной части шейки матки. Выдача результата осуществляется в соответствии с классификацией Bethesda.
Преимущества жидкостной цитологии
- Улучшенное качество материала:
a) в контейнер со стабилизирующим раствором попадает весь полученный эпителиально-клеточный материал;
б) минимизируется содержание слизи, форменных элементов крови, элементов воспаления, разрушенных клеток;
в) клетки сохраняют как морфологические, так и молекулярно-биологические свойства. - Длительный срок хранения полученного биоматериала: материал хранится в специальном стабилизирующем растворе PreservCyt, который предотвращает преждевременное высыхание клеток, что позволяет сохранить образец в оптимальных условиях для дальнейшей транспортировки в лабораторию.
- Быстрое приготовление цитологического препарата.
- Из полученного биологического материала можно приготовить несколько цитологических препаратов.
- Приготовление стандартизированного монослойного мазка.
- Стандартизированные методики окрашивания. Таким образом, по сравнению с традиционным методом приготовления мазка со слизистой шейки матки, применение новой технологии жидкостной цитологии позволяет значительно повысить качество цитологического мазка.
Главный недостаток цитологического исследования традиционного мазка из шейки матки – большая доля (до 20-40%) ложноотрицательных заключений. Ошибки цитологического метода более чем в 60% вызваны нарушениями процедур взятия и подготовки материала для исследования. Основными причинами неадекватности цитологического препарата, приготовленного традиционным способом, являются недостаточное количество эпителиально-клеточного материала в мазке, неравномерное распределение биологического материала на стекле, большое содержание слизи, элементов воспаления, форменных элементов крови, высокая частота артефактов по причине высыхания препарата после взятия мазка (нарушение правил влажной фиксации), неполное прокрашивание клеточного материала из-за его многослойности (толстый мазок).
Технология жидкостной цитологии является стандартизированной технологией приготовления цитологического препарата. Использование технологии жидкостной цитологии позволяет снизить количество ложных результатов благодаря использованию стабилизирующего раствора, а также специального инструмента для взятия материала – щеточки Cervex-Brush (рис. 1).
Рис. 1. Пластиковая щетка-кисточка типа Cervex-Brush
Ограничения метода жидкостной цитологии В тонкослойных мазках, приготовленных методом ЖЦ, отсутствуют элементы фона, что улучшает качество препарата с точки зрения оценки клеток, но в то же время не всегда дает возможности оценить клеточное окружение с точки зрения воспалительного процесса (наличия лейкоцитов, микрофлоры и пр.).
Особенности технологии ThinPrep®:
- Консервирующая среда во флаконе для взятия образца выполнена на основе метанола: метанол обладает лучшими консервирующими свойствами и не приводит к деформации клеток.
- Технология вакуумной мембранной фильтрации позволяет:
а) получать стандартизированные препараты высокого качества диаметром 2 см;
б) эффективно проводить очистку препарата от слизи и эритроцитов;
в) концентрировать диагностически значимые элементы на фильтре с последующим переносом на стекло;
г) контролировать толщину клеточного слоя на фильтре и получать монослойный, информативный препарат стандартной клеточности вне зависимости от исходной клеточности образца;
д) сохранять в препарате воспалительные элементы (лейкоциты, бактерии, грибы и пр.) для оценки общего состояния. - Высокое качество препарата обеспечивает значительное увеличение выявляемости интраэпителиальных поражений (в два и более раз по сравнению с традиционным цитологическим исследованием).
- Содержимое флакона можно использовать для проведения дополнительных исследований: ПЦР-тесты на вирус папилломы человека и другие ИППП, иммуноцитохимические тесты и другие исследования (в том числе отсроченные, так как крышка флакона остается неповрежденной после обработки образца в процессоре).
- Методика ThinPrep позволяет работать как с гинекологическим, так и с негинекологическим материалом.
- Автоматическая сверка штрих-кода на флаконе с образцом и на стекле исключает возможность ошибки и обеспечивает прослеживаемость каждого образца.
- Большим преимуществом технологии ThinPrep® является максимальный уровень автоматизации исследования, что позволяет обеспечить стандартизацию и высокое качество результата.
Литература
- American Cancer Society (ACS), American Society for Colposcopy and Cervical Pathology (ASCCP), and American Society for Clinical Pathology (ASCP). Cervical Cancer Screening Guidelines for Average-Risk Women. – Atlanta, GA 30329-4027 USA. 2012. https://www.cdc.gov/cancer/cervical/pdf/guidelines.pdf.
- Arbyn M., Anttila A. et al. European guidelines for quality assurance in cervical cancer screening (second edition). Luxembourg: Office for Official Publications of the European Communities. 2008:25.
- Ferenczy A., Coutlee F., Franco E., Hankins C. Human papillomavirus and HIV coinfection and the risk of neoplasias of the lower genital tract: a review of recent developments. Canadian Medical Association. 2003;169(5):431-434.
- Franco E.L., Duarte-Franco E., Ferenczy. Cervical cancer: epidemiology, prevention and the role of human papillomavirus infection. Canadian Medical Association. 2001;164(7):1017-1025.
- Shroyer K.R., Chivukula M. et al. CINtec® p16 Cervical Histology Compendium & Staining Atlas. Roche Diagnostics International Ltd. CH-6343 Rotkreuz. – Switzerland. 2012. https://www.roche.com/index.htm.
- Schwartz S.M., Daling J.R., Shera K.A. et al. Human Papillomavirus and prognosis of invasive cervical cancer: a population-based study. Journal of cancer and clinical oncology. 2001;19(7):1906-1915.
- Shlay J.C., Dunn T., Byers T et al. Prediction of cervical intraepithelial Neoplasia grade 2-3 using risk assessment and human papillomavirus testing in women with atypia on Papanicolaou smears. Obstetrics and Gynecology. 2000;96:410-416.
- Solomon D., Davey D., Kurman R. et al. The 2001 Bethesda System. Terminaligy for reporting results of cervical cytology. Journal of the American Medical Association. 2002;16:2114-2118.
- World Health Organization (WHO). Comprehensive Cervical Cancer Control. A guide to essential practice. – WHO, Geneva. 2006. https://www.who.int/reproductive-health/publications/cervical_cancer_gep/text.pdf.
- Wright T.C. Jr., Cox J.T., Massad L.S. et al. 2001 Consensus Guidelines for the Management of Women with Cervical Cytological Abnormalities. Journal of the American Medical Association. 2002;287(16):2120-2129.
- Воробьев С.Л., Иванова Т.М. и др. Цитологический скрининг рака шейки матки. – М. 2013:15.
- Клинические рекомендации МЗ РФ от 02.11.2017. Доброкачественные и предраковые заболевания шейки матки с позиции профилактики рака. – М. 2017. https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/71716538/#1000.
- Национальный стандарт РФ. ГОСТ Р57005-2016. Диагностика в онкологии. Скрининг. Рак шейки матки. – М.; Изд. «Стандартинформ». 2016. https://files.stroyinf.ru/Data/621/62185.pdf.
- Приказ МЗ РФ от 26.10.2017 г. № 869н «Об утверждении порядка проведения диспансеризации определенных групп взрослого населения». – М. 2017. https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/71730314/.
Источник
