Впч количественный с генотипом

В современной медицине важную роль в диагностике заболеваний играет лабораторная диагностика. Развитие современной науки, химии, познаний о человеческом организме и свойстве всевозможных биологически активных соединений позволяют проводить высокоточную диагностику, используя буквально капли крови или даже обычные соскобы с кожи и слизистых. При диагностике ВПЧ количественный анализ поможет определить какие штаммы вируса присутствуют в организме, на сколько они активны в данный момент жизни человека.

Содержание

• Что такое количественный анализ ВПЧ
• Как проводят анализ
• Расшифровка анализа ПЦР
• Что дают результаты анализа?

Что такое количественный анализ ВПЧ

Количественное определение ВПЧ направлено на выявление присутствия в организме человека определенных видов вируса, степени их активности. Эти показатели являются ведущими при определении того, какие виды папилломавируса поразили пациента, уровня их онкогенности, необходимости лечения. Вирус папилломы человека невозможно полностью уничтожить после заражения, но существует масса способов максимально снизить его активность. В связи с этим люди, страдающие постоянными проявлениями вируса должны периодически проходить обследование на наличие опасных штаммов инфекционного агента, определение их активности. В противном случае не представляется возможным четко отслеживать и контролировать ситуацию, заболевание пускается на самотек, что может привести к не самым лучшим последствиям.

Современные методики позволяют несколькими путями определить количество и типы ВПЧ в организме. Среди них чаще всего используются:

1. Определение наличия антител к вирусу. Антитела – специфические белки иммунной системы. Против каждого инфекционного агента, попавшего в организм, вырабатываются полностью уникальные антитела (иммуноглобулины). Эти иммуноглобулины подходят к белкам вирусов и бактерий, как ключ к замку. Зная эту особенность в лабораторных условиях к сыворотке исследуемой крови добавляют вирусные белки. Если происходит химическая реакция, то говорят о положительном результате – в сыворотке найдены антитела против данного вируса, что свидетельствует о его наличии в организме. Сделать можно практически в любой больнице.
2. Digene-тест. Специфическая методика, разработанная одноименной корпорацией. Сущность метода базируется на выявлении 18 типов наиболее высоконкогенных вирусов папилломы человека. Для теста используются биологические жидкости, биоптаты. В исследуемый материал добавляются специальные флуоресцентные вещества, связывающиеся с вирусной ДНК. Если после проведения анализ в исследуемом материале выявляется флуоресценция – это свидетельствует о наличии того или иного вида папилломавируса.
3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). «Золотой стандарт» диагностики папилломной инфекции. Метод основан на искусственном увеличении количества копий вирусной ДНК в исследуемом материале. Благодаря этому наличие даже единичных вирусов во взятых материалах будет определено с высокой точностью.

Как проводят анализ

Для проведения количественного анализа на ВПЧ могут использовать следующие материалы:

• Капиллярная кровь (из пальца). Довольно распространенная методика забора биологического материала. Очень часто используется при проведении нескольких анализов, направленных на выявление иных инфекций, биохимических показателей крови.
• Соскобы с кожи или слизистых. Абсолютно безболезненная методика, при которой ватной палочкой или специальным шпателем аккуратно забирают верхние слои эпителия. Забор материала происходит в пораженной области, что увеличивает информативность метода.
• Биоптаты тканей. Очень часто, особенно при подозрении на развитие злокачественного новообразования производится особая диагностическая процедура – биопсия. При этом забирается часть поражённой ткани, после чего она подвергается исследованию под микроскопом и, если того требует клинический случай, — лабораторной диагностике на предмет наличия вирусных ДНК или специфических опухолевых белков.

Тенденцией современной медицины является стремление к максимальной безболезненности проводимых процедур. В связи с этим, наибольшего распространения достигли методики диагностики, способные работать с соскобами поверхности эпителия. В отдельных случаях – используется взятие капиллярной крови. Биопсия применяется только в крайних, труднодиагностируемых случаях.

Рекомендуем почитать:

1. Кератопапиллома
2. Салициловая кислота от бородавок
3. Чем отличается папиллома от бородавки

К диагностике и определению типов ВПЧ прибегают в тех случаях, когда происходит поражение папилломами половых органов (особенно шейки матки), появляются подозрения на возможное развитие злокачественных опухолей из ранее доброкачественных наростов, массивной папилломной инфекции, склонной к частым рецидивам.

Перед сдачей анализов следует пройти определенную подготовку:

• Не принимать в течении 12 часов перед процедурой противогрибковых, противомикробных и противовирусных средств.
• В день перед сдачей анализов принять душ, вымыться, очистить исследуемую область от волосяного покрова.
• Воздержаться от полового акта в течении 2 – 3 дней перед проведение диагностической процедуры.

Расшифровка анализа ПЦР

Люди, которые сделали анализ ПЦР, являющийся оптимальным среди всех методов диагностики, через несколько дней получают его результаты, которые могут интерпретировать как специалисты, так и сами пациенты. Исследование проводится сразу для нескольких типов ВПЧ, которые наиболее вероятны у данного больного и наиболее опасны с точки зрения прогноза развития онкологических заболеваний.

Среди всех ВПЧ наиболее опасными принято считать типы, вызывающие остроконечные кондиломы или предраковые состояния: 6, 11, 13, 18, 30, 31, 42, 43, 57 – 59, 67, 70. Именно их ДНК ищется в исследуемых образцах биологических материалов, взятых на диагностику. Если геном данных типов вирусов обнаружен, то ставится «+» — тест положителен. В зависимости от количества выявленных ДНК могут различать слабоположительные результаты («+»), умеренно положительные («++»), явно положительные («+++»). Помимо этого, существует Lg система оценки концентрации вирусов в организме, которая обозначается как: Lg 1 – 3 – малая концентрация вирусных частиц, Lg 4 – 5 – клинически значимые показатели, Lg 6 и выше – крайне высокое содержание ВПЧ в организме.

Окончательную интерпретацию анализов должен проводить практикующий врач, который будет обращать внимание на лабораторные данные и на клинические проявления. В противном случае возможна ложная трактовка результатов.

Что дают результаты анализа?

Проведение любых анализов – возможность подвести любые симптомы и нарушения в организме под цифровые показатели. Это значительно облегчает не только трактовку субъективных изменений в теле человека, но и позволяет более точно подобрать лечение в конкретно рассматриваемом случае.

Если после сдачи анализов на наличие онкогенных типов вируса папилломы человека пришли отрицательные результаты, то дальнейшие действия зависят сугубо от вашего желания. Если вас беспокоят проявления папилломной инфекции, то можете в любой момент начать их лечение как консервативно, так и с использование активной тактики, направленной на удаление наростов.

В случае, когда тест оказался положительным ситуация становится несколько неоднозначнее. При слабоположительных результатах и отсутствии клинически значимых проявлений лечение может быть нецелесообразно. Это связано с тем, что если на теле не обнаружено наростов, то нет точки, на которую могут воздействовать современные лечебные мероприятия.

Когда анализы умеренно или выражено положительны, то в большинстве случаев имеются проявления инфекции в виде папиллом или полипов. Если при этом выявляются онкогенные виды вируса, то лечение необходимо начинать как можно скорее. Оно должно быть направлено на полное удаление всех бородавок на теле с целью максимальной профилактики их перерождения в злокачественные новообразования.

Папилломавирус человека (ВПЧ), Human papillomavirus (HPV) принадлежит к семейству паповавирусов (Papovaviridae), роду папилломавирусов. Это ДНК-содержащий мелкий вирус, термостабильный. Является самой распространенной инфекцией, передающейся половым путем: по некоторым данным, в молодом возрасте отмечается инфицирование до 80% населения. Вирус проявляет тропность к эпителию кожи, слизистых оболочек гениталий и других органов (гортань, ротовая полость, слизистая конъюнктивы).

Основной путь передачи — половые контакты, включая анальный, оральный секс, к сожалению, использование презервативов не защищает от инфицирования данным вирусом. Возможна передача при тесном контакте кожи, слизистых оболочек с инфицированными областями. Важным фактором инфицирования новорожденного с последующим развитием респираторного папилломатоза гортани является инфицирование при прохождении по половым путям во время родоразрешения. На сегодняшний день известно более 100 видов вируса папилломы человека (ВПЧ) и из них более 40 могут вызвать поражение аногенитального тракта (половые органы и задний проход) мужчин и женщин и появление остроконечных кондилом. Папилломавирусы можно разделить на 3 основные группы:

• неонкогенные ВПЧ (1, 2, 3, 5 генотипы);

• низкого канцерогенного риска (НКР) ВПЧ (6, 11, 42, 43, 44 генотипы);

• высокого канцерогенного риска (ВКР) ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68 генотипы).

ВПЧ низкого канцерогенного риска (ВПЧ НКР): группа вирусов, которая приводит к доброкачественным поражениям, представлена 5 генотипами, но основными являются 6 и 11, которые составляют до 90% всех случаев инфицирования данными вирусами. Наиболее частые клинические проявление ВПЧ НКР- это остроконечные кондиломы (Condylomata acuminata). Также выделяют еще разновидности остроконечных кондилом: кератотические бородавки с локализацией на сухой коже, папулезные бородавки с локализацией на полностью ороговевшем эпителии, гигантская кондилома Бушке-Левенштейна (встречающаяся у больных сниженным клеточным иммунитетом или при беременности). Эндоуретральные кондиломы локализуются в уретре, часто сочетаются с обычными кондиломами и встречаются преимущественно у мужчин. Кондиломы шейки матки часто сочетаются с генитальными кондиломами: экзофитные кондиломы, эндофитные (плоские).

ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР): группа типов высокого канцерогенного риска представлена 15 генотипами, наиболее распространенными из которых являются десять: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59. При этом на долю 16 и 18 типов приходится 70% всех случаев инфицирования, и именно данные типы характеризуются высоким канцерогенным потенциалом, в отношении 18 генотипа наблюдается высокая частота выявления при аденокарциномах. На сегодняшний день доказана роль ВПЧ в развитии рака шейки матки, большей доли рака заднего прохода (около 90% случаев), около 40% всех случаев рака влагалища, вульвы, полового члена, 10–15% случаев рака ротовой полости и гортани.

Вирусная ДНК способна персистировать в клетке в двух формах: эписомальной (продуктивная стадия) и интегрированной (интегрированная стадия). На эписомальной стадии происходит усиленная продукция новых вирусов, что способствует вовлечению в патологический процесс новых клеток, однако клетки не теряют контроль над процессами апоптоза и эта стадия характеризуется доброкачественными изменениями со стороны эпителия. Интегрированная стадия — это стадия, когда вирус встраивается в геном клетки и приводит к суперэкспрессии онкобелков Е6, Е7, ассоциируется с предраковыми изменениями и требует соответствующей тактики лечения пациента.

Инфекция, вызываемая вирусом папилломы человека, имеет ряд важных особенностей, без учета которых использование ВПЧ-тестирования сопряжено с рядом трудностей в трактовке результатов.

С одной стороны:

• ВПЧ является самой распространенной ИППП (до 80% лиц молодого возраста инфицированы данным вирусом);

• при инфицировании большинство женщин (около 80%) излечиваются от ВПЧ в течение 9–15 месяцев от момента заражения без проведения лечебных процедур (т. е., при повторении теста на генотипирование через год возможно исчезновение выявленного ранее генотипа ВПЧ или изменение спектра генотипов). С возрастом способность к самоэлиминации значительно снижается;

• инфицирование ВПЧ и заболевание — НЕ СИНОНИМЫ! Инфекция приводит к развитию предрака у малой части инфицированных женщин (около 0,5%);

• от заражения до развития предрака и РШМ, в среднем, проходит 10–20 лет. С возрастом способность к элиминации вируса снижается, соответственно, повышается риск развития предрака и рака;

• отсутствуют эффективные методы лечения на стадии латентной инфекции (нет изменений в цитологической и/или кольпоскопической картине, но выявляется вирус).

С другой стороны:

• ВПЧ является основной причиной рака шейки матки. Инфицированные женщины имеют в 300 раз более высокий риск развития рака. Разработаны не только методы вторичной профилактики (цервикальный скрининг для выявления предраковых стадий), но и первичной — вакцинация девочек и мальчиков в возрасте 9–12 лет;

• инфекция коварна и довольно часто не вызывает никаких жалоб у пациента и не выявляется при осмотре до перехода в стадию инвазивного рака;

• клинические проявления папилломавирусной инфекции высокого риска могут маскироваться другими заболеваниями урогенитального тракта, что не позволяет вовремя выявить их с использованием традиционных методов.

Из перечисленных особенностей папилломавирусной инфекции следует, что:

1. Положительный результат тестирования на наличие вируса должен трактоваться как:

• принадлежность пациента к группе высокого риска по развитию рака шейки матки;

• потребность в дополнительных тщательных диагностических процедурах для выяснения текущей стадии инфекции, исключения тяжелой дисплазии и рака шейки матки;

• необходимость в наблюдении за инфекцией (персистенцией) при отсутствии клинических или субклинических проявлений.

2. Отрицательный результат тестирования трактуется как отсутствие риска развития тяжелой дисплазии и рака.

Лабораторная диагностика. Диагностика ВПЧ инфицирования определяется клиническими проявлениями и клиническими задачами прогноза риска развития ВПЧ-ассоциированных злокачественных новообразований.

Лабораторные методы диагностики ВПЧ инфекции:

• прямые методы: оценка наличия койлоцитов в цитологических мазках (низкая диагностическая чувствительность); выявление наличия маркеров пролиферации р16/ki 67; молекулярные методы (ПЦР анализ), которые проводятся в формате качественного и количественного тестирования с возможностью генотипирования, определение генотипов НКР и ВКР ВПЧ;

• серологические методы не используются для диагностики ВПЧ инфекции.

Стратегии использования ВПЧ-тестов в диагностике предрака и рака шейки матки:

• входит в комплекс цервикального скрининга: в качестве теста сортировки патологических ПАП тестов у женщин до 30 лет; тест совместно с цитологическим исследованием для всех женщин старше 30 лет. В данном случае наличие инфицирования ВПЧ (особенно, 16 и 18 генотипом, с высокой вирусной нагрузкой) позволяет прогнозировать высокий риск наличия или развития РШМ, что определяет необходимость дополнительных обследований. В случае отрицательных результатов ВПЧ тестирования, периодичность скрининга может быть увеличена до 3–5 лет (в разных странах действуют различные рекомендации) при условии отсутствия изменений в цитологическом исследовании;

• рекомендован в некоторых странах как тест первичного скрининга на РШМ у женщин старше 30 лет;

• контроль эффективности лечения дисплазий (первое исследование проводится через 6 месяцев после лечения совместно с ПАП тестом). При этом в случае получения положительных результатов ВПЧ теста и нормальной цитологии, необходимо дополнительное обследование, т. к. риск наличия или развития патологии высокий.

Различные методы молекулярной диагностики (ПЦР анализа) позволяют решить различные диагностические задачи:

• качественный формат позволяет выявить наличие инфицирования, однако не позволяет оценить клинически значимые количества вируса, которые ассоциируются с высоким риском наличия предраковых поражений;

• количественный формат позволяет выявить вирус, определить вирусную нагрузку. Это позволяет оценить не только степень риска, но и возможное уже наличие предраковых изменений, т. к. высокая вирусная нагрузка ассоциируется с реализацией онкогенного потенциала вируса. При правильном и стандартизированном заборе клинического материала вирусная нагрузка менее 105 геномных эквивалентов (ГЭ) ВПЧ ВКР в соскобе (Josefsson et al, 2000; van Duin et al, 2002; Dalstein et al, 2003; Snijders et al, 2003; Moberg et al, 2004, 2005) или 103 ГЭ приходящихся на 100 тыс. клеток человека считается клинически малозначимой, так как практически не встречается при тяжелой дисплазии и РШМ, а также ассоциирована с минимальным риском их развития. Напротив, количество вируса более 105 ГЭ, приходящихся на 100 тыс. клеток при установленном факте персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года), обозначается как повышенная нагрузка ВПЧ и ассоциировано с повышенным риском развития тяжелой дисплазии и чаще встречается при РШМ. Наконец, определенной информацией обладает мониторинг вирусной нагрузки. Так, считается, что снижение количества ДНК ВПЧ более чем на 1 lg может являться маркером транзиторной инфекции. Рост вирусной нагрузки через 3, 6 и 9 мес. после проведенного лечения свидетельствует о возможности рецидива.

Генотипирование ВПЧ дает дополнительные возможности определения прогноза течения заболевания. Необходимость генотипирования может быть оправдана, т. к.:

• выявление нескольких генотипов вируса ассоциировано с менее благоприятным прогнозом течения заболевания и более высоким риском персистенции;

• степень онкогенности различных генотипов высокого риска не одинакова. Наибольшей онкогенностью обладают 16 и 18 типы ВПЧ, существуют рекомендации по проведению определения этих двух генотипов вируса после теста на широкий спектр типов с целью более агрессивной тактики ведения пациентов: при выявлении 16 и 18 генотипов рекомендуется сразу проводить кольпоскопическое обследование, при выявлении других типов высокого риска — сначала проводить цитологию, и только при положительном результате цитологии проводить кольпоскопию;

• проведение генотипирования позволяет отличить реинфицирование от персистирования инфекции при повторном визите пациента. Получать подобную информацию тем более важно, так как опасность представляет именно хроническая персистентная форма инфекции, недавнее же инфицирование, наиболее вероятно, спонтанно излечивается. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистирующей инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования; повторное инфицирование тем же генотипом вируса после самостоятельного излечения практически невозможно.