Пцр впч квант 15

ПЦР-лаборатория медицинского центра «Айболит» предлагает исследования HPV КВАНТ, предназначенные для выявления, типирования и количественного определения ДНК вируса папилломы человека в режиме реального времени.

Возможны три варианта в зависимости от количества выявляемых типов вируса папилломы человека:

HPV квант-4 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18;

• HPV квант-15 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68;
• HPV квант-21 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82.

При абсолютном типе анализа программно рассчитывается количество копий ДНК вируса в забранном образце. При относительном типе анализа количество ДНК вируса нормализуется на количество геномной ДНК (КВМ) в данном образце, т. е. на

количество клеток в образце. КВМ используется для исключения ошибок преаналитического этапа. В случае недостаточного для анализа количества забранного материала требуется повторное взятие клинического материала.

В исследованиях HPV КВАНТ также осуществляется вычисление суммарной нагрузки HPV.

При качественном типе анализа определяется только наличие ДНК выявляемых типов HPV в образце.

ВНИМАНИЕ! Клинически значимая концентрация вируса составляет не менее 103 копий ДНК HPV на образец (при корректном взятии материала), что характеризует высокий уровень инфекции и может привести к развитию неоплазии шейки матки.

Поэтому при анализе результатов ПЦР по умолчанию используется программное ограничение полученных значений концентрации вируса, если они не попадают в клинически значимый диапазон.

Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неправильное взятие может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биоматериала.

Особенности взятия материала из уретры

• перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5–2 часов;
• непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, который можно смочить стерильным физиологическим раствором;
• при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15–20 минут после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия биоматериала;
• в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1–1,5 см, у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры.

Особенности взятия материала из цервикального канала

• перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором;
• зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5–1,5 см;
• при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

Особенности взятия материала с шейки матки

• материал берётся до проведения мануального исследования;
• перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь, воспалительный экссудат или кровь (если они есть);
• далее необходимо аккуратно соскоблить эксфолиативный клеточный материал и
• поверхностный эпителий из влагалищной порции шейки матки, области зоны трансформации (ЗТ) и/или цервикального канала, если соединение многослойного плоского и призматического эпителия смещено в цервикальный канал.

Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой

• Откройте крышку пробирки.
• С помощью одноразового зонда сделайте соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (уретра, цервикальный канал, шейка матки).
• Перенесите зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой и тщательно прополощите его, избегая разбрызгивания жидкости. Затем извлеките зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и удалите избыток жидкости с зонда о стенки пробирки. Использованный зонд утилизируйте. При необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов повторите процедуру, каждый раз забирая материал новым зондом в новую пробирку.
• Плотно закройте крышку пробирки, промаркируйте пробирку.

Стоимость исследований:

HPV квант-4 – 650 руб.

HPV квант-15 – 1300 руб.

HPV квант-21 – 1500 руб.

Срок выполнения – 2 -3 рабочих дня.

Краткое описание

Подготовка к сдаче

Подготовка к исследованию, порядок взятия материала и хранения:
Материал для исследования: Соскобы эпителиальных клеток из цервикального канала, с шейки матки, из уретры.
• Специальной подготовки к исследованию не требуется. Перед взятием материала из уретры пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.
• Материал для исследования «КВАНТ 15» должен быть взят одним из первых, поскольку это количественное ПЦР-исследование. Не рекомендуется выполнять соскоб в течение 3-4 недель после предыдущего.
• Забор осуществлять ДО проведения мануального исследования.
• Накануне не проводить туалет половых органов и спринцевание. Зеркало перед манипуляцией можно смочить горячей водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано.
• Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал минимальное количество СЛИЗИ, КРОВИ, ГНОЯ и максимальное количество эпителиальных клеток.
• Забор материала осуществляется в отдельную пробирку (не путать с пробирками на ПЦР) 1,5 мл «эппендорф» с транспортной средой голубого цвета (физ. раствор или «Проба-Рапид»).
• Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать. На пробирке и в сопроводительных документах (в базе в комментариях) необходимо указать место взятия.
• В сопроводительном документе необходимо указать: пол, ФИО, возраст, диагноз, дату взятия пробы.
Транспортировка и хранение исследуемого материала. Если время транспортировки биологического материала с момента взятия до момента его доставки в лабораторию от 2 часов до суток, то пробирку с биоматериалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4 + 10оС), не замораживая.
В случае невозможности доставки образца в лабораторию в течение суток, допускается однократное замораживание и хранение образца биоматериала при -20оС до 1 месяца.

Подробное описание

Интерпретация результата:
Референсные значения: отрицательно.
Клинически значимая концентрация вируса составляет не менее 10? копий ДНК HPV на образец (при корректном взятии материала), что характеризует высокий уровень инфекции и может привести к развитию неоплазии шейки матки. Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате, изменении его количества с течением времени.

Диагностика папилломавируса – ВПЧ Квант 4, 15 21, Мультикомплексы в режиме реального времени, количественно

ПЦР-лаборатория медицинского центра «Айболит» предлагает исследования HPV КВАНТ, предназначенные для выявления, типирования и количественного определения ДНК вируса папилломы человека в режиме реального времени.

Возможны три варианта в зависимости от количества выявляемых типов вируса папилломы человека:

HPV квант-4 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18;

• HPV квант-15 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68;
• HPV квант-21 – предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82.

При абсолютном типе анализа программно рассчитывается количество копий ДНК вируса в забранном образце. При относительном типе анализа количество ДНК вируса нормализуется на количество геномной ДНК (КВМ) в данном образце, т. е. на

количество клеток в образце. КВМ используется для исключения ошибок преаналитического этапа. В случае недостаточного для анализа количества забранного материала требуется повторное взятие клинического материала.

В исследованиях HPV КВАНТ также осуществляется вычисление суммарной нагрузки HPV.

При качественном типе анализа определяется только наличие ДНК выявляемых типов HPV в образце.

ВНИМАНИЕ! Клинически значимая концентрация вируса составляет не менее 10 3 копий ДНК HPV на образец (при корректном взятии материала), что характеризует высокий уровень инфекции и может привести к развитию неоплазии шейки матки.

Поэтому при анализе результатов ПЦР по умолчанию используется программное ограничение полученных значений концентрации вируса, если они не попадают в клинически значимый диапазон.

Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неправильное взятие может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биоматериала.

Особенности взятия материала из уретры

• перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5–2 часов;
• непосредственно перед взятием биоматериала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, который можно смочить стерильным физиологическим раствором;
• при наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15–20 минут после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия биоматериала;
• в уретру у женщин зонд вводится на глубину 1–1,5 см, у детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры.

Особенности взятия материала из цервикального канала

• перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором;
• зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5–1,5 см;
• при извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

Особенности взятия материала с шейки матки

• материал берётся до проведения мануального исследования;
• перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь, воспалительный экссудат или кровь (если они есть);
• далее необходимо аккуратно соскоблить эксфолиативный клеточный материал и
• поверхностный эпителий из влагалищной порции шейки матки, области зоны трансформации (ЗТ) и/или цервикального канала, если соединение многослойного плоского и призматического эпителия смещено в цервикальный канал.

Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой

• Откройте крышку пробирки.
• С помощью одноразового зонда сделайте соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (уретра, цервикальный канал, шейка матки).
• Перенесите зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой и тщательно прополощите его, избегая разбрызгивания жидкости. Затем извлеките зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и удалите избыток жидкости с зонда о стенки пробирки. Использованный зонд утилизируйте. При необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов повторите процедуру, каждый раз забирая материал новым зондом в новую пробирку.
• Плотно закройте крышку пробирки, промаркируйте пробирку.

Стоимость исследований:

HPV квант-4 – 650 руб.

HPV квант-15 – 1300 руб.

HPV квант-21 – 1500 руб.

Срок выполнения – 2 -3 рабочих дня.

HPV-КВАНТ. Выявление, типирование и количественное определение вирусов папилломы человека

Транскрипт

1 HPV-КВАНТ Выявление, типирование и количественное определение вирусов папилломы человека

2 HPV-КВАНТ НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ, ТИПИРОВАНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ПЦР Одно из основных мест среди злокачественных опухолей репродуктивной системы занимает рак шейки матки (РШМ). Это заболевание находится на втором месте по распространенности (после рака молочной железы) и составляет около 14 % от всех злокачественных опухолей у женщин. На территории Российской Федерации отмечается высокий уровень запущенных стадий рака шейки матки более чем 40 % всех выявленных случаев. Ежегодно в России от РШМ умирают более женщин. В возрастной группе лет РШМ является второй по значимости причиной смертности больных злокачественными новообразованиями после рака молочной железы. На сегодняшний день установлено, что этиологическим агентом РШМ является папиллома-вирусная инфекция. Показано, что ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) выявляется более чем в 99,5% всех биоптатов у пациенток с раком шейки матки. На сегодняшний день известно более 120 типов ВПЧ, из них около 30 могут инфицировать эпителий урогенитального тракта. По способности вызывать злокачественные перерождения эпителия их делят на две группы: высокого и низкого онкогенного риска. К группе высокого онкогенного риска относят следующие типы ВПЧ: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82. При этом тип 16 является наиболее распространенным в Европе и выявляется более чем в 50 % всех случаев РШМ. К группе папиллом низкого онкогенного риска относят типы 6, 11, 36, 42, 43, 44, 46, 47, 50. Инфекция, вызванная этими типами, обычно протекает в виде доброкачественных поражений шейки матки и кондилом гортани. ВПЧ обычно поражает эпителий зоны трансформации шейки матки, в котором и вызывает предраковые изменения. Принято считать, что прогресс от инфицирования эпителия до развития РШМ занимает не менее 5 лет (в среднем лет) и только в очень редких случаях этот процесс может происходить за 1-2 года. Поэтому значительное место в профилактике РШМ должны занимать исследования, позволяющие определить наличие ВПЧ-инфекции и предраковые изменения на ранних стадиях развития заболевания. Методы обследования: v клинико-визуальный метод; v кольпоскопия; v молекулярно-биологические методы (ПЦР, тест DIGENE); v цитологическое исследование мазков, полученных из эндо- и экзоцервикса (мазки по Папаниколау, РАР-тест); v жидкостная цитология; v гистологический метод. Наиболее распространенным исследованием при скрининге на РШМ и предраковые изменения эпителия является цитологическое. При этом точность этого способа диагностики сильно варьирует в зависимости от методики взятия материала, технологии фиксации и приготовления мазков и квалификации исследователя. 2

3 Развитие молекулярной биологии и установление роли вирусов папилломы человека в развитии РШМ привели к тому, что ДНК-диагностика ВПЧ-инфекции рассматривается в настоящее время как основа скрининга и профилактики этого тяжелого заболевания, и во многих странах накоплен положительный опыт применения различных методов определения ДНК ВПЧ в скрининговых исследованиях. Согласно рекомендациям по комплексной борьбе с раком шейки матки, опубликованным Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в 2010 г., анализ на наличие ВПЧ при обследовании в рамках скрининга рекомендован по крайней мере один раз женщинам в возрасте лет или, если это возможно, каждые 3 года в возрасте лет. В соответствии с национальными рекомендациями, представленными в руководстве для врачей по профилактике РШМ, начало скрининга 25 лет, с интервалом каждые 3 года (для женщин моложе 50 лет) и 5 лет (для женщин лет). Обследование на наличие ДНК ВПЧ показано для пациенток с ASCUS (от англ. atypical squamous cell undetermined significance атипичные клетки плоского эпителия неясного значения) и для мониторинга терапии цервикальных поражений высокой степени (CIN III (от англ. сervical intraepithelial neoplasia цервикальная интраэпителиальная неоплазия), рак in situ, инвазивный рак). В случае обнаружения ДНК ВПЧ у пациенток с ASCUS повторный анализ рекомендован через 12 месяцев. На основании накопленных данных были сформулированы требования к молекулярно-биологическим методам обнаружения ДНК ВПЧ: не менее 10 высокоонкогенных типов (16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58); высокая чувствительность более 95 %; высокая специфичность; ВПЧ-тест должен быть простым и быстрым в исполнении, недорогим, учет результатов должен быть автоматизирован. Диагностика ПВИ и выявление ВПЧ в рамках скрининга РШМ с использованием метода ПЦР также могут включать определение вирусной нагрузки. Данное исследование может быть использовано для: определения тактики ведения пациента; динамического наблюдения; оценки эффективности лечения; прогноза течения заболевания. Материал для исследования методом ПЦР: v соскоб из цервикального канала, уретры, влагалища; v соскоб с поверхности кожи и слизистых; v соскоб с поверхности экзофитной кондиломы; v предметное стекло с имеющимся материалом для цитологического исследования; v ткани, полученные при биопсии. Несомненными преимуществами использования ДНК-диагностики являются: генотипирование и количественная оценка папиллом высокого и низкого онкогенного риска; высокая аналитическая чувствительность; высокая аналитическая специфичность теста; высокая скорость проведения анализа. Компания «ДНК-Технология» разработала комплекты реагентов для выявления, типирования и количественного определения вируса папилломы человека методом ПЦР (табл. 1). 3

4 Таблица 1. Комплекты реагентов для выявления папилломавирусных инфекций, производство компании «ДНК-Технология» Наименование возбудителя HPV-квант-4 (6, 11, 16, 18) HPV-квант-15 (16, 31, 33, 35, 52, 58, 6, 11, 18, 39, 45, 59, 51, 56, 68) HPV-квант-21 (6, 11, 44, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) HPV-квант-4 (16, 18) Формат детекции Каталожный номер ФСР Форез Flash Rt qpcr Rt qpcr * * 2010/08811 R1-P315-S3/4 R1-P315-S1/4 * * 2010/08811 R1-P316-S3/4 R1-P316-S3/4 * * 2010/08811 R1-P317-S3/5 R1-P317-S3/5 * * 2010/08811 R1-P324-S3/4 R1-P324-S3/4 Формат наборов: Наборы раскапаны в пробирки: стрипованные (8 шт. по 0,2 мл) Формы комплектации: HPV-квант-21. Комплект реагентов для выявления, типирования и количественного определения вируса папилломы человека методом ПЦР. Предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, определения. HPV-квант-15. Комплект реагентов для выявления, типирования и количественного определения вируса папилломы человека методом ПЦР. Предназначен для выявления HPV 16, 31, 33, 35, 52, 58, 6, 11, 18, 39, 45, 59, 51, 56, определений. HPV-квант-4. Комплект реагентов для выявления, типирования и количественного определения вируса папилломы человека методом ПЦР. Предназначен для выявления HPV 6, 11, 16, определений. HPV-квант-4. Комплект реагентов для выявления, типирования и количественного определения вируса папилломы человека методом ПЦР. Предназначен для выявления HPV 16, определений. Температура хранения: С. Срок годности: 6 месяцев. Рекомендуемые комплекты реагентов для выделения ДНК: ПРОБА-НК-ПЛЮС, ПРОБА-ГС-ПЛЮС. Оборудование, необходимое для проведения анализа: приборы серии ДТ производства ООО «НПО ДНК-Технология» (ДТлайт, ДТпрайм, ДТ-96). 4

5 Для проведения анализа с использованием стрипованных пробирок необходимо дополнительное оборудование: штатив и насадка на микроцентрифугу-вортекс для стрипованного пластика. Особенности комплекта: одновременная детекция (мультиплексный анализ) в одной пробирке определяется несколько ДНК-мишеней; внутренний контрольный образец (ВК) присутствует в каждой пробирке с амплификационной смесью, необходим для контроля прохождения полимеразной цепной реакции; контроль взятия материала (КВМ) требуется для анализа качества взятия исследуемого материала. В относительном типе анализа используется для нормализации количества ДНК вируса в образце; маркер используется прибором для определения положения стрипованных пробирок (стрипов) в плашке. Приборы серии ДТ производства компании «ДНК-Технология» оснащены специально разработанным русскоязычным программным обеспечением (ПО), поддерживающим автоматическую обработку данных и выдачу результатов исследования в удобной для интерпретации форме. Существенным преимуществом ПО является возможность одновременной реализации качественного и количественного мультиплексного анализа. Количественное определение ДНК ВПЧ представлено двумя типами анализа: абсолютным и относительным. При абсолютном типе анализа после прохождения амплификации автоматически рассчитывается количество копий ДНК вируса в образце. При относительном типе анализа используется подход нормализации количества ДНК вируса на количество геномной ДНК человека. При этом предоставляется возможность выбора параметров нормализации: на 1, 10, 100, 1000, 10000, клеток в образце. Уникальные технические характеристики приборов позволяют существенно сократить общее время проведения анализа. Значительная экономия времени исследования обеспечивает высокую пропускную способность лаборатории. 5

6 Кроме того, программа позволяет выдавать результаты в удобной и наглядной форме для анализа полученных данных врачами-клиницистами (рис. 1). Результаты Название исследования Относительный, Абсолютный, Качественный (Х/КВМ) Lg (копия/образец) 1 HPV 31 не выявлено не выявлено 2 HPV 35 не выявлено не выявлено 3 HPV 16 1,4 6,2 + 4 HPV 52 не выявлено не выявлено 5 HPV 33 не выявлено не выявлено 6 HPV 68 не выявлено не выявлено 7 HPV 45 не выявлено не выявлено 8 HPV 82 не выявлено не выявлено 9 HPV 51 не выявлено не выявлено 10 HPV 6 2,6 7, HPV 44-0,2 4, HPV 11 не выявлено не выявлено 13 HPV 18 не выявлено не выявлено 14 HPV 39 не выявлено не выявлено 15 HPV 58 не выявлено не выявлено 16 HPV 66 не выявлено не выявлено 17 HPV 26 не выявлено не выявлено 18 HPV 53-0,1 4, HPV 59 2,1 6, HPV 56 0,7 5, HPV 73 не выявлено не выявлено 22 КВМ 4,8 Рис.1. Результаты количественного анализа ПЦР 6

7 Клинически значимая концентрация вируса составляет не менее 10 3 копий ДНК ВПЧ на образец (при корректном взятии материала), что характеризует уровень инфекции как высокий и может привести к развитию неоплазии шейки матки. Внимание! Информация, содержащаяся в рекламном буклете, может не совпадать с актуальной версией спецификации на указанный продукт 7

8 Контакты офиса: ООО «ДНК-Технология» Адрес: Москва, Варшавское шоссе, д. 125 Ж, корп. 6 Тел./факс: (495) Телефон горячей линии: (звонок по России бесплатный)

Статья написана по материалам сайтов: unilab.su, mc-aybolit.ru, docplayer.ru.