Пцр мазок на впч с генотипированием

Пцр мазок на впч с генотипированием thumbnail

Пцр мазок на впч с генотипированием

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

анализ пцр на впчАнализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

  • наличие ВПЧ;
  • штаммы, которыми инфицирован больной;
  • количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.штаммы вируса папилломы человека

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. папилломы у мужчин и женщин ВПЧ распространяется следующими путями:

  • при незащищенных половых контактах;
  • при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
  • контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
  • во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  фото: впч высокого онкогенного риска у женщин

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

  1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
  2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
  3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
  4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Читайте также:  Знакомства с больными впч

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

  • собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
  • нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
  • реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

взятие мазка у мужчинГоловка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

взятие мазка у женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

фото: данные пцр исследования

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

  • Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
  • Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
  • Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.
Читайте также:  Впч 58 высокого риска

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Источник

Информация об исследовании

ВЫСОКИЙ РИСК РАЗВИТИЯ РАКА (вызывает опухоли области головы и шеи, РАК шейки матки, прямой кишки, полового члена, легких). Выдается ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ РЕЗУЛЬТАТ по КАЖДОМУ ТИПУ.

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) – широко распространенная и наиболее вариабельная группа вирусов, инфицирующих человека. Это маленькие безоболочечные ДНК-вирусы, являющиеся представителями семейства Papillomaviridae. В настоящее время идентифицировано более 100 типов ВПЧ, 80 из которых хорошо описаны.  Количественное определение высокоонкогенных типов ВПЧ (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59) рекомендовано рядом международных организаций (ASCCP, ESIDOG, EUROGIМ, ECOG, WHO) и российской группой экспертов («Профилактика рака шейки матки», руководство для врачей).

Вирус папилломы человека относится к семейству Papillomaviridae. Вирионы не имеют оболочки и содержат ДНК. Более 30 типов ВПЧ могут инфицировать эпителиальный слой урогенитального тракта. В зависимости от онкогенного потенциала выделяют вирусы высокого (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) и низкого (типы 6, 11, 42, 43, 44) онкогенного риска. Основной путь передачи возбудителя — половой (генитально-генитальный, мануально-генитальный, орально-генитальный), однако возможна передача и при непосредственном соприкосновении (кожный контакт). Риск передачи даже при однократном половом контакте равен 80%, особенно у девушек, не достигших половой зрелости. В период полового созревания у девушек естественным состоянием шейки матки является биологическая трансформация эктопированного на влагалищную порцию шейки матки цилиндрического эпителия, что облегчает проникновение вирусных частиц в клетки. ВПЧ обладает тропностью к эпителиальным тканям (кожа, слизистые оболочки) вне зависимости от их локализации и проникает в клетку через микроскопические порезы и потертости (дефекты). Несмотря на то, что большинство людей на протяжении жизни инфицируются этим возбудителем, чаще всего инфицирование заканчивается самопроизвольной элиминацией вируса из организма. Тем не менее у 5–10% пациентов ВПЧ персистирует, что в конечном итоге может приводить к появлению доброкачественных или злокачественных изменений кожи и слизистых оболочек. Вирус папилломы человека — единственный вирус, который не проникает в кровь, вследствие чего инфекционный процесс протекает без развития воспалительной реакции. Перенесенная ПВИ не защищает от повторного инфицирования. Средняя продолжительность времени между первичным инфицированием ВПЧ и развитием РШМ составляет 20 лет. В целом персистирующая ПВИ заканчивается раком лишь в 1,5% случаев. Лучшей профилактикой рака шейки матки является организованный скрининг – систематическое тестирование у бессимптомных женщин, так как эффективных лекарственных препаратов от вируса папилломы, вызывающего заболевание, нет.

Факторы риска ВПЧ-инфекции: 

  • Сексуальное поведение (раннее начало половой жизни, большое количество половых партнеров);
  • Другие ИППП (хламидиоз, гонорея, трихомониаз, сифилис, инфицированность вирусом простого герпеса, вирусом иммунодефицита человека, цитомегаловирусная инфекция и др.);
  • Изменения иммунного статуса;
  • Терапия сопутствующей патологии цитостатиками (онкологических заболеваний, состояний после трансплантации органов).  

Анализ ВПЧ   (типы 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59)  колич. позволяет:

  1. контролировать адекватность забора материала по наличию в образце достаточного количества эпителиальных клеток, что обеспечивает высокую чувствительность и специфичность теста;
  2. определять суммарное количество всех типов;
  3. динамически наблюдать за вирусной инфекцией и более точно прогнозировать ее развитие.

Исследование для выявления возбудителя папиллома-вирусной инфекции проводится с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (Real-Time) определяется генетический материал (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце, полученном из урогенитального тракта. 

Показания к назначению исследования

Определение группы риска по развитию рака шейки матки 
женщинам от 21 года, находящимся в группе риска по заражению ВПЧ 
Скрининговые программы с цитологическим исследованием для женщин старше 30 лет
Обследование при неопределенных и сомнительных результатах цитологических исследований
Контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии шейки матки (CIN II ) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия
Проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями не папилломавирусной этиологии

Подготовка к исследованию

За 2 недели исключить прием противовирусной терапии
За 3 дня влагалищные формы лекарственных средств,  интравагинального УЗИ и кольпоскопии
За сутки исключить половой контакт
Не должно быть менструальных выделений (рекомендовано либо за 5 дней до начала менструации, либо через 5 дней после окончания)
Беременным до 22 недель берет медицинская сестра если нет угрозы, с 22-30 недели -если нет угрозы, берет гинеколог по записи, с 30 недели только принесенный материал.
Соскоб из урогенитального тракта (у мужчин – уретра) рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания.

Читайте также:  Кондиломы при отрицательном впч

Источник

В праздничные дни расписание лабораторных отделений изменится. Уточняйте информацию по телефону 8 (800) 550-13-13.

Информация об исследовании

ВЫСОКИЙ РИСК РАЗВИТИЯ РАКА (вызывает РАК шейки матки, прямой кишки, полового члена, головы, шеи, легких).

Выдается ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ КАЧЕСТВЕННЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ПО КАЖДОМУ ТИПУ.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) относится к подгруппе А семейства паповирусов (Papoviridae). Репродукция ВПЧ происходит в ядрах клеток, где вирусная ДНК присутствует в виде эписомы. Это первая особенность, отличающая ВПЧ от других онкогенных ДНК-содержащих вирусов, которые могут встраивать свой геном в ДНК трансформированной клетки. Вторая особенность заключается в том, что состояние клетки хозяина регулирует экспрессию вирусного генома. Однако, вирусный ген, ответственный за репликацию клеточной ДНК, также может транскрибироваться, заставляя клетку хозяина снова и снова делиться вместе с ВПЧ, что приводит к продуктивному типу воспаления. ВПЧ инфицирует клетки эпителия, вызывая появление кожных бородавок и папиллом слизистой оболочки мочеполовых, дыхательных путей и пищеварительного тракта. 

Использование современных алгоритмов диагностики и широкое внедрение молекулярно-биологических методов позволило обнаружить десятки типов папилломавирусов, отличающихся по эпидемиологической роли. В настоящее время выявлено более 60 типов ВПЧ, специфичных по тропности к различным тканям. Известно, что ВПЧ 2 типа поражает преимущественно кожу, вызывая появление бородавок. ВПЧ 6 и 11 типов считаются низкой степени онкогенного риска и ассоциируются с развитием генитальных кондилом (множественных выростов соединительной ткани, покрытых многослойным плоским эпителием) и лёгкой степени цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН). Для ВПЧ 11 типа также доказана ассоциация с кондиломами гортани. Для аногенитальной области специфичны 12 типов ВПЧ высокой степени онкогенного риска. ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 36, 39, 45, 52, 56, 58, 59, проникая в переходную зону шейки матки, вызывают ЦИН I, II, III степени и карциному. ВПЧ этих типов обнаруживают в 50-80% образцов с ЦИН II, III степени и в 90% инвазивного рака. Число копий ДНК вирусов папилломы человека в цервикальных образцах зависит от тяжести поражения и от типа ВПЧ. Метод, применяемый в Лаборатории Гемотест, основан на одновременной амплификации и детекции в режиме «реального времени». С помощью него можно выявлять ДНК ВПЧ основных филогенетических групп – А9 (16,31,33,35,52,58), А7 (18,39,45,59), А5/А6 (51,56) с указанием количества копий в 1 мл (количественный метод) и проводить генотипирование каждого из 12 типов ВПЧ высокой степени онкогенного риска. 

Алгоритм диагностики ВПЧ высокой степени онкогенного риска, рекомендуемый Лабораторией Гемотест: 

Раздел ПЦР-диагностика 
1 этап –скрининг 
А) Вирусы папилломы человека типы 16, 31, 35, 39, 59 (кач) 
Б) Вирусы папилломы человека типы 18, 33, 45, 52, 58. 67 (кач) 
2 этап – проводится после получения положительного результата скрининга 
А) Вирус папилломы человека – ДНК групп: А9 (16,31,33,35,52,58), А7 (18,39,45,59), А5/А6 (51,56), (колич.без генотипирования) 
Б) Вирус папилломы человека (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59) генотипирование

Показания к назначению исследования

Определение группы риска по развитию рака шейки матки 
женщинам от 21 года, находящимся в группе риска по заражению ВПЧ 
Скрининговые программы с цитологическим исследованием для женщин старше 30 лет
Обследование при неопределенных и сомнительных результатах цитологических исследований
Контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии шейки матки (CIN II ) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия
Проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями не папилломавирусной этиологии

Подготовка к исследованию

За 2 недели исключить прием противовирусной терапии
За 3 дня влагалищные формы лекарственных средств, интравагинального УЗИ и кольпоскопии
За сутки исключить половой контакт
Не должно быть менструальных выделений (рекомендовано либо за 5 дней до начала менструации, либо через 5 дней после окончания)
Беременным до 22 недель берет медицинская сестра если нет угрозы, с 22-30 недели -если нет угрозы, берет гинеколог по записи, с 30 недели только принесенный материал.
Соскоб из урогенитального тракта (у мужчин – уретра) рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания.

Факторы, влияющие на результаты исследований

Прием противовирусной терапии менее чем за 2 недели до исследования
Проведение менее чем за 3 дня вагинальные исследования, спринцевания
Для мужчин мочеиспускание менее чем за 2-3 часа до исследования

Интерпретация результата


Результат Обнаружено – означает наличие ВПЧ с указанием конкретного типа.  
Результат не обнаружено – следует интерпретировать как отсутствие в образце специфических участков ДНК ВПЧ.

Синонимы русские

Папиллома-вирусы человека, вирусы папилломы человека

Синонимы английские

HPV, Papillomavirus hominis 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59

Источник