Квм мазок на впч

Что такое количественный анализ ВПЧ

Количественное определение ВПЧ направлено на выявление присутствия в организме человека определенных видов вируса, степени их активности. Эти показатели являются ведущими при определении того, какие виды папилломавируса поразили пациента, уровня их онкогенности, необходимости лечения.

Вирус папилломы человека невозможно полностью уничтожить после заражения, но существует масса способов максимально снизить его активность. В связи с этим люди, страдающие постоянными проявлениями вируса должны периодически проходить обследование на наличие опасных штаммов инфекционного агента, определение их активности.

Современные методики позволяют несколькими путями определить количество и типы ВПЧ в организме. Среди них чаще всего используются:

1. Определение наличия антител к вирусу. Антитела – специфические белки иммунной системы. Против каждого инфекционного агента, попавшего в организм, вырабатываются полностью уникальные антитела (иммуноглобулины). Эти иммуноглобулины подходят к белкам вирусов и бактерий, как ключ к замку. Зная эту особенность в лабораторных условиях к сыворотке исследуемой крови добавляют вирусные белки. Если происходит химическая реакция, то говорят о положительном результате – в сыворотке найдены антитела против данного вируса, что свидетельствует о его наличии в организме. Сделать можно практически в любой больнице.
2. Digene-тест. Специфическая методика, разработанная одноименной корпорацией. Сущность метода базируется на выявлении 18 типов наиболее высоконкогенных вирусов папилломы человека. Для теста используются биологические жидкости, биоптаты. В исследуемый материал добавляются специальные флуоресцентные вещества, связывающиеся с вирусной ДНК. Если после проведения анализ в исследуемом материале выявляется флуоресценция – это свидетельствует о наличии того или иного вида папилломавируса.
3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). «Золотой стандарт» диагностики папилломной инфекции. Метод основан на искусственном увеличении количества копий вирусной ДНК в исследуемом материале. Благодаря этому наличие даже единичных вирусов во взятых материалах будет определено с высокой точностью.

Сдать анализы на впч рекомендуют пациентам, у которых во время осмотра диагностированы папилломы, потому что важно не только выявить вирус в организме, но и определить его тип, количество на момент впч типирование.

Положительный результат ДНК типирования при отсутствии проявления болезни означает, что необходимо проводить профилактику развития вируса. Полностью вылечить вирус папилломы невозможно, но при помощи современной медицины можно уменьшить активность вируса на несколько лет.

Соскоб на впч у женщин поможет на ранней стадии выявить поражения, предшествующие раку. Если изменения не будут обнаружены, то лечение не обязательно, организм способен бороться с вирусом сам.

Соскоб на впч может быть взят также: со слизистой рта, зева, носа, влагалища, цервикального канала, уретры, прямой кишки.

Каждой женщине после 30 лет рекомендуется сдавать данный анализ и повторять периодически через 3-5 лет.

Виды анализов на папилломавирус

Карцинома шейки матки – самое распространенное заболевание, связанное с инфицированием папилломавирусом, от него до сих пор ежегодно умирает несколько сотен человек. Поэтому все женщины должны ежегодно проходить гинекологический осмотр с цитологическим мазком, а после 30 лет – сдавать анализ на ВПЧ. Бесплатно по полису ОМС такой анализ не делают. В поликлинике по месту жительства можно выполнить только цитологический мазок.

Мужчины сталкиваются с анализами, если инфицирована их партнерша (партнер), поскольку лечение надо проходить одновременно, или у них самих обнаружены поражения, связанные с ВПЧ – кондиломы, болезнь Боуэна, бовеноидный папулез.

Сегодня для выявления ВПЧ в организме применяется два метода молекулярной биологии:

• полимеразно-цепная реакция;
• метод гибридного захвата (digene-test).

Существуют и другие методы, но они используются редко и не стандартизированы.

И ПЦР, и дайджин-тест достаточно информативны и точны. Между ними есть сходства – оба основаны на выявлении ДНК вируса в клетках эпителия человека, биоматериал для анализа берется одинаково. Различия состоят в способах обработки материала и получения результата.

Прогрессивная методика, разработка которой продвинула вперед многие области науки, в том числе медицины. Метод основан на многократном умножении отдельных фрагментов ДНК в полученном клеточном материале.

Для выполнения анализа на папилломавирус используется специальный прибор-аплификатор. В нем молекула ДНК нагревается до 80-90 градусов и разделяется на две нити – РНК. К ней добавляют вещества-праймеры, и полученная смесь охлаждается. После этого в смесь добавляется фермент ДНК-полимераза и нуклеотиды. Смесь снова нагревается до температуры 37 градусов, при которой будет происходить нужная реакция.

Если искомая последовательность присутствует в материале (совпадает с добавленным праймером), то нуклеотиды присоединяются к концам праймеров, и участок ДНК удваивается путем естественной репликации. Затем процесс повторяется многократно, до накопления требуемого количества фрагментов, которые удается распознать.

Таким образом можно выявить даже единичный вирус или бактерию в организме, поэтому метод очень точный. Однако стоимость его высока, поскольку полученный материал нужно много раз нагреть и охладить за короткий промежуток времени. Температура в аппарате при этом контролируется до 0,1 градуса.

Объем исследования может быть разным, а зависимости от того, какой нужен результат. Обычно тот или иной тип анализа рекомендует лечащий врач, потому что именно он оценивает полученные результаты, одновременно учитывая клинические проявления и индивидуальный анамнез пациента.

Подготовка к анализам

Вирусом папилломы человека на земле инфицированы миллиарды людей, потому что распространен он чрезвычайно широко. Однако далеко не у всех в течение жизни проявляются какие-либо клинические симптомы. Чаще всего иммунная система человека справляется с заражением, и носитель вируса даже не узнает о том, что был в опасности.

В последние десятилетия, после множества проведенных исследований, ученые пришли к выводу, что некоторые типы штаммы ВПЧ обладают онкогенностью, то есть повышают риск злокачественного перерождения клеток.

Эти штаммы передаются преимущественно половым путем (хотя возможен бытовой или вертикальный – от матери к ребенку). Вирус поражает эпителий интимных органов, а результат его разрушительной работы обычно обнаруживает врач-гинеколог, уролог, дерматовенеролог, онколог.

ВПЧ приводит к формированию остроконечных и плоских кондилом у мужчин и женщин, а также других, некондиломатозных поражений (например, бовеноидного папулеза). Женщинам гинеколог часто ставит диагноз «интраэпителиальная неоплазия шейки матки». Вторая и третья степень этого заболевания считается предраковым состоянием и требует очень внимательного отношения.

Опасными в плане развития рака сегодня считаются штаммы под номерами HPV 70, 68, 64, 59, 50, 39, 33, 31, 18, 16. Их называют вирусами высокого онкогенного риска (ВКР). Данные штаммы провоцируют опухоли шейки матки, вульвы, влагалища  у женщин и полового члена у мужчин.

В последние годы публикуется информация (например, в журнале Journal of Clinical Oncology и других медицинских изданиях) о связи ВПЧ с раком полости рта, горла, ануса, прямой кишки, что связывают с распространением орального и анального секса, в том числе среди однополых партнеров.

Пик заражения ВПЧ всегда приходится на начало активной половой жизни, а вот риск развития рака повышается с возрастом и накопленными болезнями. Чем старше человек, и чем дольше он инфицирован онкогенным штаммом, тем выше опасность.

Как уже говорилось, и в ПЦР-анализе, и в дайджин-тесте используется генетический материал. Для его получения необходимо выполнить забор клеток эпителия из урогенитального тракта. Обычно у женщин берут соскоб из цервикального канала, у мужчин – из уретры. Иногда используется материал из прямой кишки, полости рта – при наличии там новообразований.

В отличие от многих других ПЦР-анализов, при исследовании ВПЧ не используют кровь, поскольку вирус в ней практически не обнаруживается.

Рекомендации для женщин:

• Чтобы получить достоверные результаты, женщине рекомендуют сдавать анализ не раньше чем через 5 дней после начала менструального цикла и не позже чем за пять дней до его окончания. Первым днем цикла считается первый день менструации. Оптимальное время сдачи анализа – первая половина цикла;
• За сутки до проведения исследования и в тот же день исключаются интимные контакты, спринцевания, использование интравагинальных лекарственных и контрацептивных средств;
• УЗИ органов малого таза с использованием интравагинального датчика, кольпоскопию и соскоб разносят во времени на 3-4 дня.

Рекомендации для мужчин:

• не мочиться за 2-3 часа до соскоба из уретры;
• отказаться от интимных контактов за 2 суток;
• общие рекомендации:
• закончить прием антибиотиков (перорально или в виде инъекций) за месяц до обследования;
• прекратить лечение с помощью местных антибактериальных или антисептических средств за 2 недели до обследования;
• в день обследования не мыть половые органы с использованием антибактериального мыла или геля.

Все это относится к плановой сдаче анализов, но если при обращении к врачу обнаружены патологические изменения, соскоб берут сразу же, без подготовки.

У женщин клетки эпителия берут на гинекологическом кресле с помощью одноразовой цитологической щеточки, которую вводят в цервикальный канал на 1-1,5 см, несколько раз прокручивают вокруг оси, затем аккуратно вынимают так, чтобы не загрязнить материал вагинальными выделениями. Это безболезненная и быстрая процедура.

Мужчине в уретру вводят специальный зонд, всего на 3-4 см, так что болевых ощущений тоже не будет.

Затем зонд или щеточку опускают в пробирку с жидкостью, прополаскивают, отжимают о стенки, вынимают. Пробирку закупоривают и отправляют в лабораторию.

Стоимость забора материала в клиниках в среднем составляет 400 руб. Эту сумму прибавляют к сумме за само исследование.

Первично анализ на ВПЧ рекомендуется сдать в следующих ситуациях:

• при плановом гинекологическом осмотре женщины старше 30 лет (если результата будет отрицательным, анализ рекомендуется сдавать каждые три года);
• при получении сомнительного цитологического мазка (ПАП-теста);
• после обнаружения на осмотре остроконечных кондилом, диспластических изменений шейки матки.
• после удаления кондилом, противовирусной терапии – через 3 месяца;
• контрольные анализы сдаются:
• при обнаружении канцерогенных штаммов ВПЧ без соответствующих клинических проявлений – через 9 месяцев с одновременным цитологическим мазком;
• после лечения выраженной неоплазии или рака шейки матки – через 3 месяца.

Если у женщины старше 30 лет анализ на онкогенный штамм ВПЧ положительный, это может означать, что инфекция персистирует, и иммунитет не может уничтожить возбудителя. До этого возраста опасность невелика – обычно повторные анализы оказываются «чистыми».

Когда наряду с положительным анализом присутствуют изменения в цитологическом мазке, это значит, что риск развития онкологической патологии высок. В этом случае рекомендуется пройти расширенную кольпоскопию с биопсией шейки матки. Одновременно назначается противовирусная терапия.

Перед беременностью анализ на ВПЧ необязателен. Заражение папилломавирусом не считается опасным, никак не влияет на протекание беременности и здоровье ребенка. Однако падение иммунитета в этот период нередко приводит к появлению остроконечных кондилом, если женщина инфицирована типами 6 и 11.

Контакт дыхательных путей ребенка во время родов с кондиломами может привести к формированию ювенильного папилломатоза гортани. Это редкое заболевание, поскольку формируется только на фоне сниженного иммунитета у самого ребенка, но все же ради своего спокойствия стоит сдать анализ заранее.

Сегодня разработана вакцина, защищающая от 6, 11, 16 и 18 типа ВПЧ, которой можно воспользоваться, если контакта с этими типами еще не было.

Для проведения количественного анализа на ВПЧ могут использовать следующие материалы:

• Капиллярная кровь (из пальца). Довольно распространенная методика забора биологического материала. Очень часто используется при проведении нескольких анализов, направленных на выявление иных инфекций, биохимических показателей крови.
• Соскобы с кожи или слизистых. Абсолютно безболезненная методика, при которой ватной палочкой или специальным шпателем аккуратно забирают верхние слои эпителия. Забор материала происходит в пораженной области, что увеличивает информативность метода.
• Биоптаты тканей. Очень часто, особенно при подозрении на развитие злокачественного новообразования производится особая диагностическая процедура – биопсия. При этом забирается часть поражённой ткани, после чего она подвергается исследованию под микроскопом и, если того требует клинический случай, — лабораторной диагностике на предмет наличия вирусных ДНК или специфических опухолевых белков.

Тенденцией современной медицины является стремление к максимальной безболезненности проводимых процедур. В связи с этим, наибольшего распространения достигли методики диагностики, способные работать с соскобами поверхности эпителия. В отдельных случаях – используется взятие капиллярной крови. Биопсия применяется только в крайних, труднодиагностируемых случаях.

К диагностике и определению типов ВПЧ прибегают в тех случаях, когда происходит поражение папилломами половых органов (особенно шейки матки), появляются подозрения на возможное развитие злокачественных опухолей из ранее доброкачественных наростов, массивной папилломной инфекции, склонной к частым рецидивам.

Перед сдачей анализов следует пройти определенную подготовку:

• Не принимать в течении 12 часов перед процедурой противогрибковых, противомикробных и противовирусных средств.
• В день перед сдачей анализов принять душ, вымыться, очистить исследуемую область от волосяного покрова.
• Воздержаться от полового акта в течении 2 – 3 дней перед проведение диагностической процедуры.

Люди, которые сделали анализ ПЦР, являющийся оптимальным среди всех методов диагностики, через несколько дней получают его результаты, которые могут интерпретировать как специалисты, так и сами пациенты. Исследование проводится сразу для нескольких типов ВПЧ, которые наиболее вероятны у данного больного и наиболее опасны с точки зрения прогноза развития онкологических заболеваний.

Среди всех ВПЧ наиболее опасными принято считать типы, вызывающие остроконечные кондиломы или предраковые состояния: 6, 11, 13, 18, 30, 31, 42, 43, 57 – 59, 67, 70. Именно их ДНК ищется в исследуемых образцах биологических материалов, взятых на диагностику. Если геном данных типов вирусов обнаружен, то ставится « » — тест положителен.

В зависимости от количества выявленных ДНК могут различать слабоположительные результаты (« »), умеренно положительные (« »), явно положительные (« »). Помимо этого, существует Lg система оценки концентрации вирусов в организме, которая обозначается как: Lg 1 – 3 – малая концентрация вирусных частиц, Lg 4 – 5 – клинически значимые показатели, Lg 6 и выше – крайне высокое содержание ВПЧ в организме.