Как делается пцр впч
Автор статьи
Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.
Общие сведения
Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.
Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:
- наличие ВПЧ;
- штаммы, которыми инфицирован больной;
- количественное содержание вируса в организме.
Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.
Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.
Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.
Показания для анализа
Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. 
ВПЧ распространяется следующими путями:
- при незащищенных половых контактах;
- при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
- контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
- во время тесного контакта с кожей больного.
Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу. 
Преимущества метода
ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:
- Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
- Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
- Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
- Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.
Недостатки метода
Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.
Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.
Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:
- собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
- нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
- реагенты были непригодными.
Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.
Виды методик
В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.
Качественный способ
Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.
Генотипирование
Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».
Комбинированный метод
Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.
Количественный метод
Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.
Как сдавать анализ
Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.
Как сдают анализ мужчины
Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.
Как сдают анализ женщины
Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.
Забор биоматериала
Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.
Расшифровка анализа ПЦР
В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.
Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:
- Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
- Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
- Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.
В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.
Источник
Существуют десятки видов вируса папилломы человека (ВПЧ). Часть из них не наносит никакого особенного вреда. Другие вызывают появление бородавок и папиллом на коже и слизистых. А самые опасные могут спровоцировать развитие онкологического заболевания, особенно у женщин. Именно поэтому ранняя и точная диагностика ВПЧ может спасти жизнь.
Что такое вирус папилломы человека (ВПЧ) и чем он опасен
Вирус папилломы человека распространен очень широко, им инфицировано 80% всей популяции планеты. Этот вирус передается от человека к человеку — при половом контакте, бытовым путем или во время родов от матери к ребенку. Попадая в организм, этот вирус встраивается в ДНК клетки, заставляя ее делиться не так, как это предусмотрено нашей «программой», а так, как нужно вирусу. Результатом становятся плоские и обычные бородавки и кондиломы. При заражении определенными типами вируса они могут перерождаться в раковые опухоли.
Важно
Самыми онкогенными считаются вирусы папилломы человека 16 и 18 типов. Вирус 16 типа находят в половине случаев рака шейки матки, вирус 18 типа — в 10% случаев.
Вирус может присутствовать в организме, но при этом никак не проявлять себя. Наша иммунная система способна долго сдерживать его. Но достаточно какого-либо сбоя в работе организма — тяжелого инфекционного заболевания, продолжительного стресса, воздействия алкоголя, никотина или наркотиков, — чтобы вирус активировался и прорвал защитный заслон.
Когда назначается анализ на ВПЧ
Если врач обнаружит на вашем теле признаки деятельности вируса, он направит вас на обследование. Мало знать, что вирус как таковой присутствует в организме — гораздо важнее выяснить его тип, поскольку, как уже было сказано, ВПЧ может быть как относительно безвредным, так и смертельно опасным.
Анализ на вирус папилломы человека необходимо сделать и в том случае, если вы планируете беременность, а также при выявлении причин бесплодия, выкидышей и патологий вынашивания. Причем обследование должны пройти оба партнера — ВПЧ передается при незащищенных половых контактах очень легко, и если один из партнеров инфицирован, то и второй, наверняка, тоже.
Какой анализ на вирус папилломы человека может быть назначен: методы исследования
Существует несколько методов лабораторной и инструментальной диагностики вируса папилломы человека. Они преследуют несколько целей: во-первых, выявить сам факт наличия вируса, во-вторых, узнать его разновидность, и в третьих — оценить нанесенный им ущерб, а также выяснить, не начался ли уже процесс перерождения безобидной кондиломы в злокачественную опухоль.
Кольпоскопическое исследование
назначается женщинам для обнаружения кондилом, расположенных в области шейки матки. Исследование достаточно простое — при помощи специального микроскопа врач осматривает слизистые оболочки шейки матки и влагалища. Многократное (8–16-кратное) увеличение позволяет увидеть даже очень маленькие кондиломы. Результат обычно выдается на руки сразу после обследования.
Цитологическое исследование
. Материалом для этого лабораторного исследования является мазок, который содержит клетки эпителия. Образцы клеток рассматриваются под микроскопом. Такое исследование позволяет заметить видоизмененные клетки, указывающие на вирусную инфекцию. Метод этот прост и дешев, но не очень точен — есть высокий риск ложноотрицательного результата. Результат анализа выдается через 5–7 дней и обозначается в бланке цифровым кодом. 1 — пораженных клеток нет, 2 — обнаружены клетки, измененные из-за воспалительных процессов, 3 — результат вызывает сомнения, необходимо дополнительное обследование, 4 или 5 — наличие пораженных клеток.
Гистологическое исследование
обычно назначают в дополнение к цитологическому. Это лабораторный метод исследования биоптата, то есть маленького фрагмента тканей. Специалист рассматривает препарат в микроскоп и оценивает состояние пораженных клеток. Гистологическое исследование дает возможность определить характер новообразования и отличить кондилому от опухоли. Обычно результат можно получить на руки через 3 дня.
Как правило, после гистологического анализа назначают ПЦР-анализ.
ПЦР-диагностика
— один из самых достоверных способов диагностики, который применяется для выявления многих бактерий и вирусов. При помощи ПЦР-диагностики можно выявить ДНК вируса даже в том случае, если количество возбудителя в крови крайне мало и он никак себя не проявляет. Точность метода приближается к 100%, однако на нее сильно влияет соблюдение техники проведения исследования. Поэтому ПЦР-анализ лучше проводить только в тех лабораториях, где строго следят за соблюдением всех стандартов. Материалом для исследования чаще всего становится мазок, но иногда исследуют околоплодные воды, мочу или кровь. Результаты исследования будут готовы через 1–2 дня, в некоторых случаях их можно получить даже в день обращения, поскольку само исследование как таковое занимает всего 4–5 часов.
ПЦР позволяет очень точно определить количество вируса в биоматериале. Конечная цифра обозначает количество геномных эквивалентов на 100 тысяч клеток. Если вирус вообще не обнаружен, то в бланке это будет указано. Если же вирус присутствует, в результатах обозначат его концентрацию.
- Lg < 3 — вирус ВПЧ есть, но его концентрация крайне мала.
- Lg 3–5 — клинически значимое количество вируса.
- Lg > 5 — высокая вирусная нагрузка.
Если любое из этих исследований даст положительный результат, врач, скорее всего, направит вас на повторный анализ. При современных методах лабораторных исследований риск ошибки низкий, однако ненулевой. Чаще всего ложноположительный результат бывает следствием загрязнения биоматериала и нарушения техники его забора, неправильно выбранного времени для исследования (например, вы прошли лечение и вирус был уничтожен, однако его следы в биоматериале еще можно обнаружить) или несоблюдения пациентом правил подготовки к анализу.
У пациентов вызывает много вопросов неоднозначная ситуация, при которой папилломы есть, тем не менее анализы не выявляют самого вируса. Так бывает, если в какой-то момент в прошлом вирус был активным и привел к формированию кондилом и папиллом, однако впоследствии иммунная система окрепла и подавила его деятельность. Но папилломы не могут рассосаться сами собой. В таком случае наилучшее решение — просто удалить папилломы и не забывать регулярно проходить обследование.
Исследуемый биоматриал
Основной биоматериал для проведения анализа на вирус папилломы человека — клетки эпителия, полученные методом мазка из уретры у мужчин и из цервикального канала — у женщин. Технически для проведения ПЦР-анализа возможно исследование крови, выделений из влагалища и уретры, околоплодных вод и мочи, однако на практике эти типы биоматериала практически не используются.
Для проведения гистологического исследования необходим биоптат, маленький образец тканей из пораженного участка, который отщипывают специальным прибором.
Правила забора биоматериала
Мазок берут при помощи миниатюрной мягкой щетки-ершика, напоминающей щеточку от туши для глаз. Раньше для этой цели использовалась так называемая ложка Фолькмана — крошечная ложка на очень длинном тонком черешке, однако сегодня данный инструмент почти никто не использует.
Щеточку осторожно вводят в канал и вынимают вращательным движением. На ворсинках остаются клетки эпителия. После этого щеточку помещают в специальную стерильную емкость и отправляют на исследование.
Для того чтобы результат анализа был точным, к забору мазка нужно подготовиться. За 2 суток для проведения исследования нельзя вступать в половые контакты, пользоваться антибактериальным мылом для интимной гигиены, проводить спринцевание. Если мазок берется из уретры, забор биоматериала производится до мочеиспускания. Перед забором мазка желательно принять душ без моющих средств.
На результат могут повлиять такие факторы, как прием антибиотиков, пробиотиков и местных антисептиков. Если за последние два месяца вы принимали какие-либо препараты, обязательно предупредите врача об этом.
Забор биоптата из шейки матки — дело гораздо более серьезное. Как и при заборе мазка, за 2 дня до биопсии нельзя вступать в половые контакты, спринцеваться, пользоваться любыми местными антибактериальными средствами и тампонами. После биопсии как минимум 2–3 недели нельзя вступать в половые контакты, при кровотечении разрешено пользоваться только прокладками, но не тампонами. Запрещены существенные физические нагрузки, перегрев, купание в бассейне или открытом водоеме, любые препараты, разжижающие кровь (в том числе обычный аспирин) и любые вагинальные средства — гели, спреи, свечи и т.п.
Где можно сдать биоматериал на анализ
Все описанные выше диагностические методы широко распространены, и сдать анализ на папилломавирусную инфекцию у женщин и мужчин можно практически в любой коммерческой или муниципальной лаборатории.
Многие люди предпочитают заплатить, чтобы избежать общения с государственными медучреждениями — и это их право. Впрочем, следует сказать, что, несмотря на явный недостаток комфорта и неудобство для пациентов, муниципальные поликлиники и диагностические центры в крупных городах прекрасно оснащены, и врачи, работающие там — специалисты высочайшего класса. Что, увы, не отменяет очередей, бюрократии и неудобного графика работы.
Если вы предпочитаете сдать анализ на вирус папилломы человека в частном медцентре, выбирайте крупное и известное учреждение, имеющее собственную лабораторию — это гарантия точности и соблюдения всех правил забора и обработки биоматериала. И, кроме того, в серьезных диагностических центрах результат можно получить быстрее, чем в маленьких компаниях. Небольшие центры часто отдают материал на исследование в сторонние лаборатории, с которыми сотрудничают на условиях аутсорса, а это заметно замедляет получение результата.
Сколько стоит исследование на выявление папилломавирусной инфекции
Стоимость исследования зависит и от уровня медицинского центра, и от его расположения. Мы приведем лишь средние для Москвы цены на анализы на вирус папилломы человека.
Кольпоскопия обойдется приблизительно в 700–1500 рублей. Цитологическое исследование стоит около 1100–2500 рублей, к этой сумме нужно прибавить стоимость забора мазка — 300–600 рублей.
Гистологическое исследование стоит 2000–3000 рублей, а забор биоптата — около 400 рублей.
Стоимость ПЦР-анализа на вирус папилломы человека с определением типа в московских лабораториях составляет 700–1900 рублей.
Сдавать анализ на вирус папилломы человека нужно регулярно, начиная с 20–25-летнего возраста. Особенно это касается женщин — не выявленный вовремя ВПЧ может привести к проблемам с зачатием, бесплодию, невынашиванию, дисплазии шейки матки и появлению злокачественных новообразований. Проходить обследование нужно раз в три года. Если вы входите в группу риска — то есть курите или употребляете алкоголь в больших количествах, часто меняете половых партнеров и болеете инфекционными заболеваниями — обследование должно проводиться раз в год.
Источник
