Впч вкр генотипирование и количественное определение днк
Диагностирование ВПЧ осложняется вялым развитием процессов в молодом организме, которые часто не дают специфической симптоматики. Для выявления болезни на ранней стадии и профилактического контроля заболеваемости используют централизованный скрининг на ВПЧ ВКР.
Что такое скрининг ВПЧ ВКР
Скрининг – это целенаправленное обследование определенных групп населения с целью выявить заболевание. Скрининг проводится по специально разработанной методике подготовленным персоналом.
ВПЧ представляет собой заразные штаммы ДНК содержащего папилломавируса.
Все папилломавирусы (а их насчитывается больше сотни) делят на:
- высокоонкогенные штаммы – вирусы, которые способны вызвать дисплазию тканей кожи или слизистых человека, с последующим их злокачественным перерождением;
- низкоонкогенные – группа вирусов, деятельность которых вызывает доброкачественные образования (папилломы, бородавки).
Обратите внимание! Аббревиатура ВКР означает высокий канцерогенный риск. ВПЧ ВКР – так обозначают штаммы вируса, которые вызывают рак. У женщин это рак шейки матки, у мужчин – рак полового члена. Для Европейских жителей и населения России это 18, 16, 31 и 45 генотипы папилломавируса.
При активизации ВПЧ типа ВКР происходит изменение и перерождение тканей, которое оканчивается злокачественным процессом.
Скрининг на папилломавирусы высокой степени онкогенности проводят пошагово, по специально разработанной схеме:
- Проведение анализа цервикального мазка на предмет наличия или отсутствия измененных клеток (дисплазии) в организме пациента (ПАП тест).
- При положительной реакции на ПАП-тест проводят количественное определение вируса, его идентификацию (расширенный скрининг).
Фото 1: Скрининг на ВПЧ ВКР показан всем женщинам, начиная с 24 летнего возраста. Проводится должен при прохождении плановой диспансеризации населения, при профессиональных медосмотрах, по личному обращению пациентки. Источник: flickr (Eugene Evehealth).
Рекомендуемая периодичность мероприятия 1 раз в 3 года.
Обратите внимание! Скрининг позволяет снизить заболеваемость раком половых органов в сотни раз, что имеет важное значение при растущей тенденции заражения.
Показания для сдачи анализов
Показанием для сдачи анализов является:
- появление кондилом (иных новообразований) на половых органах, в анальной зоне или ротовой полости;
- выделения из половых органов неясной этиологии;
- личное беспокойство человека по поводу возможного заражения после незащищенного контакта;
- профилактический контроль.
Важность обследования
Важно! Выявление дисплазии тканей слизистых половых органов на ранней стадии имеет решающее значение при прогнозе эффективности терапии. Раннее выявление ВПЧ ВКР в организме позволяет принять превентивные терапевтические меры для его уничтожения.
От инфицирования до развития рака проходит от 5 до 15 лет. Выявление латентной формы присутствия вируса в организме дает:
- возможность динамического контроля состояния половых органов и деятельности вируса (вирусоносителям повторяют обследование ежегодно);
- возможность раннего лечения, когда прогноз наиболее благоприятен.
Статистика показывает, что рак шейки матки занимает 3 место среди онкологии половых органов женщины. Исследования причин развития онкопатологии матки подтверждают прямую связь между инфицированием ВПЧ ВКР и последующим развитием рака.
Фото 2: Каждая 8 из 10 женщин, перешагнувших 50-летний рубеж, заражена или переболела ВПЧ. Эта цифра увеличивается год от года в связи с все большей сексуальной активностью населения. Источник: flickr (Eugene Evehealth).
Виды скрининга на ВПЧ ВКР
Наиболее информативной и недорогой является методика скрининга, которая используется в России – исследование на цитологию позволяет на первом этапе «отсеять» здоровых обследуемых, дальнейшее исследование проводить только пациентам с выявленной дисплазией тканей.
Анализ на цитологию (ПАП-тест)
ПАП-тест это анализ по методике Папаниколау.
Этот вид тестирования отличает высокая точность анализа.
Для проведения анализа делается забор материала из цервикального канала шейки матки у женщин или уретры у мужчин. Процедура безболезненная, проводится в условиях обычного осмотра.
Материал помещается либо на стекло (уходящая практика), либо в специальную жидкостную среду, что удобнее для проведения исследования.
Жидкостный ПАП-тест берется специальной щеточкой, которая помещается в подготовленную жидкую среду для транспортировки и хранения. Такая методика забора и хранения биоматериала позволяет сохранить и проанализировать все клетки взятого эпителия.
Как подготовиться к процедуре
Для того, чтобы ПАП-тест был максимально достоверным следует соблюдать несколько условий:
- за 2 дня до посещения врача отказаться от половых контактов, спринцеваний, введения вагинальных медицинских средств;
- женщинам визит следует планировать в первой половине менструального цикла, но после полного окончания месячного кровотечения;
- исследование не проводят в период обострения хронических инфекций или остропротекающих заболеваний;
- исследование не проводят непосредственно после курса антибактериальной или противовоспалительной медикаментозной терапии.
Расширенный скрининг
Обратите внимание! Расширенный скрининг представляет собой контролируемый забор биоматериала для проведения анализа в режиме реального времени на определение не только наличия или отсутствия ВПЧ, но и типа, количества папиллома вируса человека онкогенной группы.
Анализ проводится методом ПЦР качественного направления на основе RT-PCR.
Данная методика позволяет интерпретировать результаты анализов для расшифровки по Дайджин-тесту. И корректировать дальнейшую тактику работы с пациентом.
Забор биоматериала не отличается от обычного взятия мазка. Требования по подготовке к расширенному тестированию такие же как и к ПАП-тесту:
- Воздержание от применения лекарственных средств влагалищных за 2 суток до;
- Воздержание на этот же период от половых контактов;
- Отсутствие менструального кровотечения.
ПЦР анализ
Анализ выявления ВПЧ с использованием полимерно-цепной реакции (ПЦР-тест) на его ДНК обладает высокой степенью достоверности. С его помощью можно определить:
- факт инфицирования;
- генотип папилломавируса;
- степень распространения (количественный анализ).
Анализ возможен на любой жидкости из организма пациента: кровь, слизистое отделяемое, моча.
Подготовка
- Женщинам не следует сдавать биоматериал из влагалища во время менструации;
- Мужчинам запрещено мочиться за 1,5 часа до процедуры;
- Кровь сдают на голодный желудок;
- При заборе материала из половых органов женщинам запрещено спринцеваться накануне вечером;
- Исключаются любые медикаменты за 2 дня до проведения забора биоматериала.
Результаты анализов
- Тест по Папаниколау (ПАП-тест) может быть отрицательным (измененные клетки не обнаружены) или положительным (во взятом образце обнаружены онкоклетки);
- ПЦР-тест показывает наличие или отсутствие ВПЧ;
- Расширенный скрининг определяет тип вируса и его количество.
Количественный результат по Дайджин-тесту интерпретируется:
- менее 3 Lg – концентрация вируса незначительная;
- от 3 Lg до 5 Lg – средняя степень присутствия;
- более 5 Lg – высокая концентрация ВПЧ.
Источник
ВПЧ – группа распространенных и генетически разнообразных вирусов, инфицирующих и поражающих эпителий кожных покровов (кожные типы ВПЧ) и слизистых оболочек ротовой полости и аногенитальной области (генитальные типы ВПЧ). Генитальные типы ВПЧ передаются преимущественно половым путем и через родовые пути от матери ребенку. Основными клиническими формами папилломавирусной инфекции гениталий являются остроконечные кондиломы, а также злокачественные формы изменения эпителиальных клеток, приводящие к раку шейки матки.
Исход инфекции зависит от типа вируса. Типы ВПЧ низкого канцерогенного риска (НКР, низкоонкогенные) связаны с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени. Типы ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР, высокоонкогенные) – 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 – наряду с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени, также индуцируют злокачественную трансформацию эпителия, приводящую к инвазивному раку.
Дифференциальная диагностика. Поражения шейки матки, влагалища, вульвы, пениса, заднего прохода непапилломавирусной этиологии; в случае остроконечных кондилом – с проявлениями, связанными с вирусом простого герпеса, а также с истинными папилломами.
Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции включает выявление и количественное определение ДНК ВПЧ ВКР, генотипирование ВПЧ ВКР, выявление ДНК ВПЧ НКР.
Материал для исследования
- Соскобы эпителия цервикального канала, влагалища, вульвы, заднего прохода – для выявления, количественного определения и генотипирования ВПЧ;
- мазки из ротовой полости и гортани – выявления ВПЧ НКР у детей.
Выявление и определение концентрации вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска
Показания к обследованию
- Определение группы риска по развитию рака шейки матки и рака заднего прохода;
- скрининговые программы с цитологическим исследованием одновременно или на первом этапе скрининга (до цитологического исследования) для женщин старше 30 лет;
- разрешение неопределенных и сомнительных результатов цитологических исследований (наличие ASCUS – атипичные плоские клетки неясного значения);
- контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии (CIN2+) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия;
- проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями непапилломарусной этиологии.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для выявления ДНК ВПЧ ВКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Культивировать вирус не удается.
Гибридный захват является первым и наиболее охарактеризованным методом выявления ДНК ВПЧ. Применение метода позволяет определять концентрацию вируса в условных единицах оптической плотности, линейный диапазон небольшой (3–4 порядка). Образцы, в которых присутствует вирус в концентрации ниже порога клинической значимости, учитываются как отрицательные. Граница клинической значимости определяется путем тестирования эталонного образца (концентрация ДНК ВПЧ 1 пг/мл). Все сигналы, значения которых ниже эталонного, считаются отрицательными. Более современными, быстрыми и удобными для использования являются методы на основе АНК. МАНК, работающие в неколичественном формате, выявляют либо ДНК вируса (ПЦР, HDA и др.), либо мРНК транскрипты онкогенов E6 и E7 ВПЧ (NASBA, TMA). Для выявления только клинически значимых концентраций (по разным методикам учета – более 1 пг/мл или 1000 копий ДНК вируса на 100000 клеток человека) используют методики с чувствительностью, при которой образцы с низкой концентрацией учитываются как отрицательные. Наиболее целесообразно использовать ПЦР в реальном времени, которая позволяет точно определить концентрацию ДНК вируса. На основе полученных данных проводится не только оценка концентрации вируса, но, что важно, проводится градация результата по клинической значимости полученной концентрации на:
- положительный – выше порога клинической значимости;
- положительный – малозначимый (ниже порога значимости);
- отрицательный.
Различные наборы реагентов могут отличаться спектром выявляемых генотипов. К группе ВПЧ ВКР относятся 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 генотипы. Наиболее канцерогенными считаются 16 и 18 типы, наименее – 51, 56, 68. Для РФ и стран СНГ клинический смысл исследования сохраняется только при определении как минимум 10 генотипов из перечисленных выше. Выявление в смеси генотипов низкого или неустановленного риска существенно снижает специфичность выделения группы риска онкологической патологии и не может быть оправдано.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Для проведения скринингового обследования на наличие предрака и рака шейки матки предпочтительным является использование мазков/соскобов эпителия цервикального канала и зоны трансформации, выполненных цервикальными цитологическими щеточками. Допускается использование для этих целей мазков из влагалища. Для скрининга рака шейки матки все тесты, вне зависимости от выбранной технологии, должны иметь сбалансированные аналитические и диагностические характеристики, удовлетворяющие следующим условиям – не менее 98% чувствительность по отношению к CIN2+ и не менее 90% специфичность относительно широко валидированного в скрининге теста (например, Hybrid Capture II). Для достижения оптимума аналитической чувствительности избирают подход отсечения образцов с концентрацией ДНК ВПЧ ниже порога клинической значимости. Для этого либо проводят искусственное снижение аналитической чувствительности, либо выбирают в качестве референтного контрольный образец с требуемой пороговой концентрацией. Предпочтительным является измерение концентрации ДНК ВПЧ методом ПЦР в реальном времени.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение ДНК ВПЧ в любой концентрации свидетельствует о наличии возбудителя, однако при интерпретации результатов тестирования следует учитывать, что более 80% инфицированных спонтанно излечиваются в течение 12–24 мес. Опасность представляет персистентная форма инфекции (сохраняющаяся более 12–24 мес.). Однократный положительный результат надежно указывает на принадлежность к группе риска развития рака шейки матки в случае, если исследование проводится в группе женщин старше 30 лет или вступивших в половую жизнь более 6–7 лет назад. Особая настороженность должна быть проявлена в отношении пациенток, у которых подтверждается персистенция вируса при повторном тестировании через 1 год. При скрининге с использованием количественных тестов принимают во внимание только клинически значимый результат. Для дифференциальной диагностики и наблюдения пациентов после проведения лечения дополнительная ценность одиночного количественного определения не показана. Перспективным в прогнозе риска рецидива CIN2+ является оценка динамики вирусной нагрузки после лечения (снижение или увеличение концентрации вируса).
Генотипирование вирусов папилломы человека. Цель генотипирования ВПЧ – отличие персистирующей инфекции от случая повторного инфицирования (сохранение генотипа в повторных тестах); уточнение тактики ведения больных в зависимости от онкогенности выявленных типов вируса.
Показания к обследованию. Пациенты с выявленной папилломавирусной инфекцией ВКР
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для генотипирования ВПЧ используют МАНК. Распространение получили методики с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза (генотипирование по величине амплифицируемого фрагмента), гибридизации на плашках и стрип-полосках, ПЦР в реальном времени.
Классические методики, использующие принцип гибридизации со специфическими зондами позволяют определять наиболее широкий спектр генотипов (20–40). Однако использование для амплификации универсальных праймеров приводит к существенным различиям в аналитической чувствительности выявления различных генотипов ВПЧ, приводя к заметным искажениям результатов. Кроме того, широкий спектр определяемых генотипов необходим только для научных исследований. В клинической практике достаточным может считаться генотипирование ВПЧ ВКР (10–13 типов). Методики, основанные на применении типоспецифических олигонуклеотидов, позволяют проводить типирование спектра клинически значимых генотипов и в заметной степени лишены проблемы различий аналитической чувствительности по отношению к разным генотипам ВПЧ. Предпочтение должно отдаваться мультиплекс-методикам с использованием ПЦР в реальном времени как наиболее быстрым, контаминационно безопасным, предполагающим возможность автоматизации. Может проводиться сокращенное генотипирование с выявлением только наиболее онкогенных типов ВПЧ 16 и 18.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Для установления персистенции вируса применяют подход повторного генотипирования через 12 месяцев. Персистенция подтверждается при сохранении генотипа/ генотипов при повторном исследовании, полная смена спектра генотипов указывает на излечение и повторное инфицирование альтернативными ВПЧ. Выявление наиболее онкогенных типов ВПЧ (16 и 18) может указывать на потребность в более агрессивной тактике ведения больных (более частые повторные визиты, более тщательное обследование для выявления предраковых изменений и др.).
Выявление вирусов папилломы человека низкого канцерогенного риска
Показания к обследованию
- Определение группы риска развития папилломатоза гортани у ребенка (беременные и новорожденные);
- дифференциальная диагностика с заболеваниями непапилломавирусной этиологии.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для выявления ДНК ВПЧ НКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Предпочтение должно отдаваться быстрым и контаминационно-безопасным методикам, таким как ПЦР в реальном времени.
Клинически оправданным является определение двух генотипов 6 и 11 (более 90% случаев папилломатоза гортани у детей). Некоторую дополнительную ценность имеет выявление 42, 43 и 44 генотипов. Количественное определение не оправдано.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Выявление 6 и/или 11 генотипов указывает на возможный риск развития папилломатоза гортани у ребенка (риск повышается, если вирус обнаружен в гортани). При планировании беременности может быть рекомендована выжидательная тактика. При сопутствующем наличии остроконечных кондилом – их лечение методом химической и/или физической деструкции. При наличии беременности ее прерывание или родоразрешение методом кесарева сечения не оправданы, так как риск развития папилломатоза гортани ниже риска возможных осложнений указанных операций.
Источник
Папилломавирус человека (ВПЧ), Human papillomavirus (HPV) принадлежит к семейству паповавирусов (Papovaviridae), роду папилломавирусов. Это ДНК-содержащий мелкий вирус, термостабильный. Является самой распространенной инфекцией, передающейся половым путем: по некоторым данным, в молодом возрасте отмечается инфицирование до 80% населения. Вирус проявляет тропность к эпителию кожи, слизистых оболочек гениталий и других органов (гортань, ротовая полость, слизистая конъюнктивы).
Основной путь передачи — половые контакты, включая анальный, оральный секс, к сожалению, использование презервативов не защищает от инфицирования данным вирусом. Возможна передача при тесном контакте кожи, слизистых оболочек с инфицированными областями. Важным фактором инфицирования новорожденного с последующим развитием респираторного папилломатоза гортани является инфицирование при прохождении по половым путям во время родоразрешения. На сегодняшний день известно более 100 видов вируса папилломы человека (ВПЧ) и из них более 40 могут вызвать поражение аногенитального тракта (половые органы и задний проход) мужчин и женщин и появление остроконечных кондилом. Папилломавирусы можно разделить на 3 основные группы:
неонкогенные ВПЧ (1, 2, 3, 5 генотипы);
низкого канцерогенного риска (НКР) ВПЧ (6, 11, 42, 43, 44 генотипы);
высокого канцерогенного риска (ВКР) ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68 генотипы).
ВПЧ низкого канцерогенного риска (ВПЧ НКР): группа вирусов, которая приводит к доброкачественным поражениям, представлена 5 генотипами, но основными являются 6 и 11, которые составляют до 90% всех случаев инфицирования данными вирусами. Наиболее частые клинические проявление ВПЧ НКР- это остроконечные кондиломы (Condylomata acuminata). Также выделяют еще разновидности остроконечных кондилом: кератотические бородавки с локализацией на сухой коже, папулезные бородавки с локализацией на полностью ороговевшем эпителии, гигантская кондилома Бушке-Левенштейна (встречающаяся у больных сниженным клеточным иммунитетом или при беременности). Эндоуретральные кондиломы локализуются в уретре, часто сочетаются с обычными кондиломами и встречаются преимущественно у мужчин. Кондиломы шейки матки часто сочетаются с генитальными кондиломами: экзофитные кондиломы, эндофитные (плоские).
ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР): группа типов высокого канцерогенного риска представлена 15 генотипами, наиболее распространенными из которых являются десять: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59. При этом на долю 16 и 18 типов приходится 70% всех случаев инфицирования, и именно данные типы характеризуются высоким канцерогенным потенциалом, в отношении 18 генотипа наблюдается высокая частота выявления при аденокарциномах. На сегодняшний день доказана роль ВПЧ в развитии рака шейки матки, большей доли рака заднего прохода (около 90% случаев), около 40% всех случаев рака влагалища, вульвы, полового члена, 10–15% случаев рака ротовой полости и гортани.
Вирусная ДНК способна персистировать в клетке в двух формах: эписомальной (продуктивная стадия) и интегрированной (интегрированная стадия). На эписомальной стадии происходит усиленная продукция новых вирусов, что способствует вовлечению в патологический процесс новых клеток, однако клетки не теряют контроль над процессами апоптоза и эта стадия характеризуется доброкачественными изменениями со стороны эпителия. Интегрированная стадия — это стадия, когда вирус встраивается в геном клетки и приводит к суперэкспрессии онкобелков Е6, Е7, ассоциируется с предраковыми изменениями и требует соответствующей тактики лечения пациента.
Инфекция, вызываемая вирусом папилломы человека, имеет ряд важных особенностей, без учета которых использование ВПЧ-тестирования сопряжено с рядом трудностей в трактовке результатов.
С одной стороны:
ВПЧ является самой распространенной ИППП (до 80% лиц молодого возраста инфицированы данным вирусом);
при инфицировании большинство женщин (около 80%) излечиваются от ВПЧ в течение 9–15 месяцев от момента заражения без проведения лечебных процедур (т. е., при повторении теста на генотипирование через год возможно исчезновение выявленного ранее генотипа ВПЧ или изменение спектра генотипов). С возрастом способность к самоэлиминации значительно снижается;
инфицирование ВПЧ и заболевание — НЕ СИНОНИМЫ! Инфекция приводит к развитию предрака у малой части инфицированных женщин (около 0,5%);
от заражения до развития предрака и РШМ, в среднем, проходит 10–20 лет. С возрастом способность к элиминации вируса снижается, соответственно, повышается риск развития предрака и рака;
отсутствуют эффективные методы лечения на стадии латентной инфекции (нет изменений в цитологической и/или кольпоскопической картине, но выявляется вирус).
С другой стороны:
ВПЧ является основной причиной рака шейки матки. Инфицированные женщины имеют в 300 раз более высокий риск развития рака. Разработаны не только методы вторичной профилактики (цервикальный скрининг для выявления предраковых стадий), но и первичной — вакцинация девочек и мальчиков в возрасте 9–12 лет;
инфекция коварна и довольно часто не вызывает никаких жалоб у пациента и не выявляется при осмотре до перехода в стадию инвазивного рака;
клинические проявления папилломавирусной инфекции высокого риска могут маскироваться другими заболеваниями урогенитального тракта, что не позволяет вовремя выявить их с использованием традиционных методов.
Из перечисленных особенностей папилломавирусной инфекции следует, что:
1. Положительный результат тестирования на наличие вируса должен трактоваться как:
принадлежность пациента к группе высокого риска по развитию рака шейки матки;
потребность в дополнительных тщательных диагностических процедурах для выяснения текущей стадии инфекции, исключения тяжелой дисплазии и рака шейки матки;
необходимость в наблюдении за инфекцией (персистенцией) при отсутствии клинических или субклинических проявлений.
2. Отрицательный результат тестирования трактуется как отсутствие риска развития тяжелой дисплазии и рака.
Лабораторная диагностика. Диагностика ВПЧ инфицирования определяется клиническими проявлениями и клиническими задачами прогноза риска развития ВПЧ-ассоциированных злокачественных новообразований.
Лабораторные методы диагностики ВПЧ инфекции:
прямые методы: оценка наличия койлоцитов в цитологических мазках (низкая диагностическая чувствительность); выявление наличия маркеров пролиферации р16/ki 67; молекулярные методы (ПЦР анализ), которые проводятся в формате качественного и количественного тестирования с возможностью генотипирования, определение генотипов НКР и ВКР ВПЧ;
серологические методы не используются для диагностики ВПЧ инфекции.
Стратегии использования ВПЧ-тестов в диагностике предрака и рака шейки матки:
входит в комплекс цервикального скрининга: в качестве теста сортировки патологических ПАП тестов у женщин до 30 лет; тест совместно с цитологическим исследованием для всех женщин старше 30 лет. В данном случае наличие инфицирования ВПЧ (особенно, 16 и 18 генотипом, с высокой вирусной нагрузкой) позволяет прогнозировать высокий риск наличия или развития РШМ, что определяет необходимость дополнительных обследований. В случае отрицательных результатов ВПЧ тестирования, периодичность скрининга может быть увеличена до 3–5 лет (в разных странах действуют различные рекомендации) при условии отсутствия изменений в цитологическом исследовании;
рекомендован в некоторых странах как тест первичного скрининга на РШМ у женщин старше 30 лет;
контроль эффективности лечения дисплазий (первое исследование проводится через 6 месяцев после лечения совместно с ПАП тестом). При этом в случае получения положительных результатов ВПЧ теста и нормальной цитологии, необходимо дополнительное обследование, т. к. риск наличия или развития патологии высокий.
Различные методы молекулярной диагностики (ПЦР анализа) позволяют решить различные диагностические задачи:
качественный формат позволяет выявить наличие инфицирования, однако не позволяет оценить клинически значимые количества вируса, которые ассоциируются с высоким риском наличия предраковых поражений;
количественный формат позволяет выявить вирус, определить вирусную нагрузку. Это позволяет оценить не только степень риска, но и возможное уже наличие предраковых изменений, т. к. высокая вирусная нагрузка ассоциируется с реализацией онкогенного потенциала вируса. При правильном и стандартизированном заборе клинического материала вирусная нагрузка менее 105 геномных эквивалентов (ГЭ) ВПЧ ВКР в соскобе (Josefsson et al, 2000; van Duin et al, 2002; Dalstein et al, 2003; Snijders et al, 2003; Moberg et al, 2004, 2005) или 103 ГЭ приходящихся на 100 тыс. клеток человека считается клинически малозначимой, так как практически не встречается при тяжелой дисплазии и РШМ, а также ассоциирована с минимальным риском их развития. Напротив, количество вируса более 105 ГЭ, приходящихся на 100 тыс. клеток при установленном факте персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года), обозначается как повышенная нагрузка ВПЧ и ассоциировано с повышенным риском развития тяжелой дисплазии и чаще встречается при РШМ. Наконец, определенной информацией обладает мониторинг вирусной нагрузки. Так, считается, что снижение количества ДНК ВПЧ более чем на 1 lg может являться маркером транзиторной инфекции. Рост вирусной нагрузки через 3, 6 и 9 мес. после проведенного лечения свидетельствует о возможности рецидива.
Генотипирование ВПЧ дает дополнительные возможности определения прогноза течения заболевания. Необходимость генотипирования может быть оправдана, т. к.:
выявление нескольких генотипов вируса ассоциировано с менее благоприятным прогнозом течения заболевания и более высоким риском персистенции;
степень онкогенности различных генотипов высокого риска не одинакова. Наибольшей онкогенностью обладают 16 и 18 типы ВПЧ, существуют рекомендации по проведению определения этих двух генотипов вируса после теста на широкий спектр типов с целью более агрессивной тактики ведения пациентов: при выявлении 16 и 18 генотипов рекомендуется сразу проводить кольпоскопическое обследование, при выявлении других типов высокого риска — сначала проводить цитологию, и только при положительном результате цитологии проводить кольпоскопию;
проведение генотипирования позволяет отличить реинфицирование от персистирования инфекции при повторном визите пациента. Получать подобную информацию тем более важно, так как опасность представляет именно хроническая персистентная форма инфекции, недавнее же инфицирование, наиболее вероятно, спонтанно излечивается. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистирующей инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования; повторное инфицирование тем же генотипом вируса после самостоятельного излечения практически невозможно.
Источник
