Впч тестирование методом пцр

Впч тестирование методом пцр thumbnail

Впч тестирование методом пцр

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

анализ пцр на впчАнализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

  • наличие ВПЧ;
  • штаммы, которыми инфицирован больной;
  • количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.штаммы вируса папилломы человека

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. папилломы у мужчин и женщин ВПЧ распространяется следующими путями:

  • при незащищенных половых контактах;
  • при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
  • контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
  • во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  фото: впч высокого онкогенного риска у женщин

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

  1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
  2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
  3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
  4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Читайте также:  Что такое копия впч

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

  • собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
  • нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
  • реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

взятие мазка у мужчинГоловка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

взятие мазка у женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Читайте также:  Диагностика и лечение впч

Расшифровка анализа ПЦР

фото: данные пцр исследования

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

  • Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
  • Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
  • Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Источник

Некоторые типы ВПЧ (всего их более 100) несут в себе канцерогенные свойства, то есть при определенных условиях способны провоцировать рост злокачественных опухолей. Вирус папилломы после проникновения в организм проявляется не сразу, он годами может нести скрытую угрозу здоровью человека. Вовремя выявить и предупредить развитие онкологических процессов поможет ВПЧ тестирование.

Что такое, и каким бывает тест на ВПЧ

Тест на ВПЧ – это исследование биоматериала взятого из цервикального канала, шейки матки (у женщин) или уретры (у мужчин). Проведенный анализ опровергает или подтверждает присутствие возбудителя, позволяет определить его тип, а также количество (вирусную нагрузку) в исследуемом материале.

%%

Однократно проводить тестирования на ДНК ВПЧ рекомендуют всем без исключения лицам до 30 лет. Если результат анализа положительный (выявлено наличие возбудителя), врач назначает дополнительные диагностические мероприятия. Если же папилломавирус не обнаружен, профилактические обследования проводят каждые 3 года.

На сегодняшний день ВПЧ тест можно провести несколькими способами:

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – расширенный тест, выявляет наличие возбудителя, его тип и вирусную нагрузку;
  • Дайджен-тест – иное название «метод гибридного захвата». Эта дифференциальная диагностика вирусов с высоким онкогенным риском (определяется тип и концентрация возбудителя);
  • ПАП-тестирование – по сути это обычный цитологический анализ мазка по Папаниколау позволяющий определить наличие нетипичных клеток шейки матки (на сегодняшний день его удалось расширить и сделать более информативным);
  • ВПЧ ПАП тест расширенный – совокупность двух исследований (ВПЧ-тест + цитологический анализ Папаниколау). Выявляет тип и количество вируса, а также наличие клеточных аномалий;
  • ВПЧ ПАП-тест жидкостный – это два исследования объеденные в одно. Здесь также выполняют тест на ВПЧ и делают цитологический забор, однако биоматериал помещают в специфическую жидкую среду, это позволяет провести более глубокое тестирование.

Важно! Важным этапом при диагностике является правильный забор биоматериала – недостаточное присутствие геномной ДНК пациента в исследуемой жидкости может дать ложный результат. Поэтому для достоверности тестирования был внедрен специальный параметр КВМ – контроль взятия материала.

ПЦР-тестирование

Для проведения ПЦР-диагностирования подходит любая биологическая жидкость пациента – влагалищные или уретральные выделения, сперма, моча. Стоимость исследования варьирует от 700 до 1500 рублей (наиболее затратным является определение сразу нескольких высоко онкогенных типов ВПЧ). Результаты, как правило, готовы на 3 – 5 день после забора биоматериала.

Для получения достоверных результатов ПЦР-анализ проводят в середине менструального цикла (не раньше чем через 5 дней после и не позднее, чем за 5 дней до начала месячных). Забор биоматериала не проводят:

  • В период менструации;
  • В течение 2 суток после полового акта;
  • В течение 2 суток после применения вагинальных препаратов с содержанием жира, а также уксусных растворов, тампонов;
  • После спринцевания;
  • После кольпоскопии или вагинального УЗИ органов малого таза.

Также мазок не берется на протяжении 2 недель после применения местных антибактериальных и антисептических препаратов (после приема системных антибиотиков должно пройти не меньше 1 месяца). Мочеиспускание проводят не позднее, чем за 2 часа до взятия мазка из уретрального канала (это касается в основном мужчин).

%%

Для выявления папилломавируса существует 4 методики ПЦР:

  • Качественный формат – показывает факт наличия вируса в организме;
  • Генотипирование – выполняют для определения типа ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР);
  • Количественный формат – определение вирусной нагрузки (концентрация возбудителя в изучаемом материале);
  • Комбинированный метод – это качественный формат + генотипирование.

Результат анализов приходит через несколько дней, их расшифровка это прерогатива врача. Однако в качестве ознакомительной информации мы расскажем, как интерпретировать обозначения:

  • Lg<3,0 – отсутствие инфекции;
  • Lg 3,0-5,0 – пограничный уровень концентрации ВПЧ (превышение нормы);
  • Lg>5,0 – высокая вирусная нагрузка.
Читайте также:  передается ли впч в воде

На основании полученных данных врач назначает максимально эффективную терапию.

Digene-тест

Дайджен или как его еще называют Дайджест-тест разработала компания Digene Diagnostics (отсюда название). В качестве исследуемого материала для анализа на ВПЧ берут соскоб из влагалища, цервикального канала, уретры. При исследовании определяют ДНК-фрагменты вируса, его тип и количественное соотношение.

Это наиболее чувствительный и точный тест (ошибки практически исключены), как правило, его применяют для выявления одного или нескольких канцерогенных типов ВПЧ способных привести к дисплазии и раку шейки матки.

Несмотря на то, что Digene-тест достаточно информативный его следует дополнять другими скрининговыми исследованиями – цитологией, кольпоскопией, ПЦР-диагностикой, ПАП-тестированием.  Золотым стандартом медицины считается Дайджен-тест + цитологическое исследование. Комплексное обследование позволяет получить развернутый результат, на основе которого врач уже будет назначать лечение.

%%

Какой-либо специфической подготовки перед проведением тестирования не требуется, достаточно выполнить обыкновенную гигиеническую процедуру (спринцевания исключены). Время проведения дайджен-теста от 7 до 14 дней.

ВПЧ ПАП-тест

ПАП-тест проводят при каждом гинекологическом осмотре – берется мазок из влагалища, внешней поверхности и канала шейки матки. Цитологический анализ по Папаниколау показывает наличие нетипичных клеток с высоким риском перерождения в онкологические опухоли. Однако этого не достаточно, ведь для адекватного лечения необходимо знать также генотип возбудителя и его количественное отношение.

Поэтому сегодня проводят расширенные тесты, включающие в себя несколько исследований.

  • ВПЧ ПАП-тест – совокупность расширенного исследования на ДНК ВПЧ и цитологию. В ходе анализа определяют серотип вируса, степень его канцерогенности и количественную нагрузку. Также проводят изучение цервикального соскоба на наличие онкопатологий шейки матки по Папаниколау – взятый мазок переносят на стекло, окрашивают специальным красящим веществом и изучают под микроскопом. Цена исследования от 2100 рублей;
  • ВПЧ ПАП-тест жидкостный (расширенный) – эта также объединенная методика включающая определение генотипа, вирусную нагрузку и степень онкогенности. В ходе анализа выполняют цитологическое исследование по Папаниколау для выявления онкопатологий, только забранный биоматериал помещают в специальную жидкостную среду. Это новая технология позволяющая снизить количество неадекватных соскобов и более точно выявить эпителиальные изменения, определить неоплазию, дисплазию или онкологию шейки матки. Стоимость анализа от 2000 рублей.

Такой инновационный подход позволяет провести сразу несколько исследований, взяв при этом один соскоб. Результаты анализов пациент получает спустя 3-7 дней после забора биоматериала.

%%

Интерпретируют жидкостный ПАП-тест следующим образом (по системе Бетезда):

  • NILM – отклонений нет, мазок нормальный;
  • ASCUS – выявлено присутствие нетипичных клеток;
  • ASC-H – обнаружен плоскоклеточный эпителий (свидетельствует о начальной степени рака);
  • LSIL – нетипичные клетки в малой концентрации (возможна начальная стадия дисплазии, ВПЧ);
  • HSIL – высокая концентрация атипичных клеток указывающая на развитие онкопатологии;
  • AGS – изменение железистого эпителия (указывает на дисплазию или онкопатологии);
  • AIS – начальная стадия онкологического процесса;
  • High-grade SIL – выявлен плоскоклеточный рак.

Важно! ПАП-тест проводят всем без исключения женщинам после начала половой жизни. Метод безболезненный, несложный однако достаточно информативный для того чтобы на ранней стадии выявить эпителиальные изменения шейки матки и предотвратить онкологические процессы.

Анализ в домашних условиях

Женщинам, которые по разным причинам не могут посетить врача, но желают сделать анализ на ВПЧ могут провести экспресс-тест самостоятельно просто в домашних условиях.

Чтобы провести исследование достаточно купить в аптеке специальный набор, но при этом нужно соблюдать некоторые правила по забору биоматериала:

  • Не проводить тест во время менструации (для взятия мазка подойдет середина цикла);
  • Перед забором нельзя спринцеваться;
  • За 2-3 дня до анализа не использовать никакие вагинальные медикаменты.

Экспресс-тест проведенный самостоятельно не является методом диагностики, это профилактический анализ, который побуждает женщину в случае положительного результата обратиться к врачу и предотвратить возможное развитие онкологии.

Не следует проводить тестирование в домашних условиях на поздних сроках беременности (особенно если имеются осложнения или угроза прерывания). Отказаться от самостоятельного ВПЧ-анализа следует девушкам, не вступавшим в сексуальные отношения, а также лицам в недавнем времени прошедшим антибиотикотерапию.

Любые анализы лучше проводить в специализированном учреждении – для цитологического исследования достаточно посетить гинеколога, а вот расширенные ВПЧ тесты выполняют в медицинских или лабораторных центрах.

Видео в тему

Источник