Пцр впч вкр количественное определение

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

• наличие ВПЧ;
• штаммы, которыми инфицирован больной;
• количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом.  ВПЧ распространяется следующими путями:

• при незащищенных половых контактах;
• при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
• контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
• во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

• собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
• нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
• реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

• Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
• Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
• Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

В современной медицине важную роль в диагностике заболеваний играет лабораторная диагностика. Развитие современной науки, химии, познаний о человеческом организме и свойстве всевозможных биологически активных соединений позволяют проводить высокоточную диагностику, используя буквально капли крови или даже обычные соскобы с кожи и слизистых. При диагностике ВПЧ количественный анализ поможет определить какие штаммы вируса присутствуют в организме, на сколько они активны в данный момент жизни человека.

Содержание

• Что такое количественный анализ ВПЧ
• Как проводят анализ
• Расшифровка анализа ПЦР
• Что дают результаты анализа?

Что такое количественный анализ ВПЧ

Количественное определение ВПЧ направлено на выявление присутствия в организме человека определенных видов вируса, степени их активности. Эти показатели являются ведущими при определении того, какие виды папилломавируса поразили пациента, уровня их онкогенности, необходимости лечения. Вирус папилломы человека невозможно полностью уничтожить после заражения, но существует масса способов максимально снизить его активность. В связи с этим люди, страдающие постоянными проявлениями вируса должны периодически проходить обследование на наличие опасных штаммов инфекционного агента, определение их активности. В противном случае не представляется возможным четко отслеживать и контролировать ситуацию, заболевание пускается на самотек, что может привести к не самым лучшим последствиям.

Современные методики позволяют несколькими путями определить количество и типы ВПЧ в организме. Среди них чаще всего используются:

1. Определение наличия антител к вирусу. Антитела – специфические белки иммунной системы. Против каждого инфекционного агента, попавшего в организм, вырабатываются полностью уникальные антитела (иммуноглобулины). Эти иммуноглобулины подходят к белкам вирусов и бактерий, как ключ к замку. Зная эту особенность в лабораторных условиях к сыворотке исследуемой крови добавляют вирусные белки. Если происходит химическая реакция, то говорят о положительном результате – в сыворотке найдены антитела против данного вируса, что свидетельствует о его наличии в организме. Сделать можно практически в любой больнице.
2. Digene-тест. Специфическая методика, разработанная одноименной корпорацией. Сущность метода базируется на выявлении 18 типов наиболее высоконкогенных вирусов папилломы человека. Для теста используются биологические жидкости, биоптаты. В исследуемый материал добавляются специальные флуоресцентные вещества, связывающиеся с вирусной ДНК. Если после проведения анализ в исследуемом материале выявляется флуоресценция – это свидетельствует о наличии того или иного вида папилломавируса.
3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). «Золотой стандарт» диагностики папилломной инфекции. Метод основан на искусственном увеличении количества копий вирусной ДНК в исследуемом материале. Благодаря этому наличие даже единичных вирусов во взятых материалах будет определено с высокой точностью.

Как проводят анализ

Для проведения количественного анализа на ВПЧ могут использовать следующие материалы:

• Капиллярная кровь (из пальца). Довольно распространенная методика забора биологического материала. Очень часто используется при проведении нескольких анализов, направленных на выявление иных инфекций, биохимических показателей крови.
• Соскобы с кожи или слизистых. Абсолютно безболезненная методика, при которой ватной палочкой или специальным шпателем аккуратно забирают верхние слои эпителия. Забор материала происходит в пораженной области, что увеличивает информативность метода.
• Биоптаты тканей. Очень часто, особенно при подозрении на развитие злокачественного новообразования производится особая диагностическая процедура – биопсия. При этом забирается часть поражённой ткани, после чего она подвергается исследованию под микроскопом и, если того требует клинический случай, — лабораторной диагностике на предмет наличия вирусных ДНК или специфических опухолевых белков.

Тенденцией современной медицины является стремление к максимальной безболезненности проводимых процедур. В связи с этим, наибольшего распространения достигли методики диагностики, способные работать с соскобами поверхности эпителия. В отдельных случаях – используется взятие капиллярной крови. Биопсия применяется только в крайних, труднодиагностируемых случаях.

Рекомендуем почитать:

1. Кератопапиллома
2. Салициловая кислота от бородавок
3. Чем отличается папиллома от бородавки

К диагностике и определению типов ВПЧ прибегают в тех случаях, когда происходит поражение папилломами половых органов (особенно шейки матки), появляются подозрения на возможное развитие злокачественных опухолей из ранее доброкачественных наростов, массивной папилломной инфекции, склонной к частым рецидивам.

Перед сдачей анализов следует пройти определенную подготовку:

• Не принимать в течении 12 часов перед процедурой противогрибковых, противомикробных и противовирусных средств.
• В день перед сдачей анализов принять душ, вымыться, очистить исследуемую область от волосяного покрова.
• Воздержаться от полового акта в течении 2 – 3 дней перед проведение диагностической процедуры.

Расшифровка анализа ПЦР

Люди, которые сделали анализ ПЦР, являющийся оптимальным среди всех методов диагностики, через несколько дней получают его результаты, которые могут интерпретировать как специалисты, так и сами пациенты. Исследование проводится сразу для нескольких типов ВПЧ, которые наиболее вероятны у данного больного и наиболее опасны с точки зрения прогноза развития онкологических заболеваний.

Среди всех ВПЧ наиболее опасными принято считать типы, вызывающие остроконечные кондиломы или предраковые состояния: 6, 11, 13, 18, 30, 31, 42, 43, 57 – 59, 67, 70. Именно их ДНК ищется в исследуемых образцах биологических материалов, взятых на диагностику. Если геном данных типов вирусов обнаружен, то ставится «+» — тест положителен. В зависимости от количества выявленных ДНК могут различать слабоположительные результаты («+»), умеренно положительные («++»), явно положительные («+++»). Помимо этого, существует Lg система оценки концентрации вирусов в организме, которая обозначается как: Lg 1 – 3 – малая концентрация вирусных частиц, Lg 4 – 5 – клинически значимые показатели, Lg 6 и выше – крайне высокое содержание ВПЧ в организме.

Окончательную интерпретацию анализов должен проводить практикующий врач, который будет обращать внимание на лабораторные данные и на клинические проявления. В противном случае возможна ложная трактовка результатов.

Что дают результаты анализа?

Проведение любых анализов – возможность подвести любые симптомы и нарушения в организме под цифровые показатели. Это значительно облегчает не только трактовку субъективных изменений в теле человека, но и позволяет более точно подобрать лечение в конкретно рассматриваемом случае.

Если после сдачи анализов на наличие онкогенных типов вируса папилломы человека пришли отрицательные результаты, то дальнейшие действия зависят сугубо от вашего желания. Если вас беспокоят проявления папилломной инфекции, то можете в любой момент начать их лечение как консервативно, так и с использование активной тактики, направленной на удаление наростов.

В случае, когда тест оказался положительным ситуация становится несколько неоднозначнее. При слабоположительных результатах и отсутствии клинически значимых проявлений лечение может быть нецелесообразно. Это связано с тем, что если на теле не обнаружено наростов, то нет точки, на которую могут воздействовать современные лечебные мероприятия.

Когда анализы умеренно или выражено положительны, то в большинстве случаев имеются проявления инфекции в виде папиллом или полипов. Если при этом выявляются онкогенные виды вируса, то лечение необходимо начинать как можно скорее. Оно должно быть направлено на полное удаление всех бородавок на теле с целью максимальной профилактики их перерождения в злокачественные новообразования.