Пцр впч с вкр вирусная нагрузка

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

• наличие ВПЧ;
• штаммы, которыми инфицирован больной;
• количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом.  ВПЧ распространяется следующими путями:

• при незащищенных половых контактах;
• при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
• контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
• во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

• собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
• нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
• реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

• Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
• Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
• Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Как известно, ВПЧ инфицированы большинство половозрелых сексуально активных людей (более 70%). Клиническая картина болезни характеризуется поражением эпителиальной ткани — кожи, слизистых оболочек. До появления клинических признаков — папиллом/папилломатоза, кондилом, бородавок, обнаружить присутствие в организме вируса стандартными методами диагностики невозможно — он долгое время может никак не проявлять себя. Но ПЦР на ВПЧ как тест используется не только для подтверждения присутствия вируса, но и для установления его принадлежности к определенному типу (их найдено более 100). Это важно для определения вероятности озлокачествления папиллом и кондилом, так как вирус имеет 3 группы онкогенности: малого риска — 6, 11 типы; среднего — 31, 33, 35 типы; высокого — 16, 18 типы. 

Показания к применению

Необходимость в проведении диагностики путем ПЦР на ВПЧ возникает в случаях:

• Контакта с людьми, которые уже имеют положительную реакцию ПЦР на вирус папилломы человека — незащищенный половой акт, самостоятельные роды инфицированной мамы (возможно заражение ребенка), использование общих предметов личной гигиены (полотенца, мочалки), тесный кожный контакт.
• Наличия таких образований, как папилломы/кондиломы на половых органах — на ПЦР пациента направляет гинеколог/уролог, с целью диагностировать папилломавирусную инфекцию, то есть, обнаружить ВПЧ, определить его онкогенность.
• Скрининговые исследования с целью раннего выявления.

Плюсы и минусы анализа

ПЦР-диагностика ВПЧ часто используется гинекологами, урологами, дерматовенерологами. Что же это такое — ПЦР-исследование?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — увеличение количества определенных участков ДНК в биологическом материале для их идентификации, применяется в диагностике инфекционных, генетических болезней, обследования на скрытые инфекции, определения родства. 

Плюсы:

• Высокий уровень специфичности.
• Высокая скорость выполнения, так как процесс автоматизирован — результаты не нужно ждать неделями.
• Один образец биоматериала можно использовать для диагностики нескольких заболеваний — достоверность анализа остается высокой.
• Высокий уровень чувствительности — обнаружение возбудителя инфекции даже при низкой концентрации в материале, что помогает начать проведение специфической профилактики.

Минусы:

• Риск ложноположительного результата — анализ сдан несвоевременно, например, материал взят сразу после лечения, когда инфекция ликвидирована, но погибшие клетки еще остались. Метод ПЦР не отличает мертвые клетки от живых.
• Риск ложноотрицательного результата — причиной являются нарушения технологического процесса:
• Неправильное хранение и транспортировка биоматериала.
• Несоблюдение правил сохранения стерильности проб.
• Просроченные/некачественные реагенты.

Выбор методики осуществляет лечащий врач

Виды анализа

Существует 4 вида анализа на папилломавирус методом ПЦР. Выбор методики осуществляет лечащий врач.

Методы проведения исследования:

• Качественный — данный способ проведения ПЦР выявляет ВПЧ, определения штамма вируса не происходит.
• Генотипирование — более глубокий анализ на ВПЧ, то есть, идентификация штамма.
• Комбинированный — метод, включающий в себя полимеразную цепную реакцию, имеющий узкую направленность — нацелен на поиск 16 штамма.
• Количественный — определяет число вирусных тел.

Генотипирование папилломавирусов

Генотипирование папилломавирусов проводят для прогнозирования динамики болезни. Целью типирования ВПЧ является не только найти вирус — важно идентифицировать штамм. Если найдено несколько штаммов — прогноз считают неблагоприятным, высока вероятность персистенции инфекции. Применяется для мониторинга эффективности противовирусной терапии. Также можно определить, является ли положительный результат качественного анализа следствием остатка ДНК возбудителя после проведенного лечения либо нового заражения (выявится новый тип, отличный от того, который определялся перед началом лечения). Результат формулируется как и в качественном методе.

Качественный способ

Определение наличия ВПЧ без установления принадлежности к какому-либо штамму, имеет значение при первичной диагностике. Результаты формулируются как «обнаружен»/»не обнаружен».

Количественное определение и комбинированный метод

Количественный анализ — подсчет содержания вирусных тел в биологическом материале (число вирусов на 100 000 клеток). Данный вид тестирования применяется для установления тяжести процесса, назначения терапии. Суть — определение количества ВПЧ в 100 тыс. клеточных единиц биоматериала (соскоба). Меньше 3 — содержание вируса низкое, больше 5 — высокое (повышена вероятность озлокачествления).

Комбинированный метод (сочетает в себе качественный и количественный) — целенаправленный поиск 16 штамма, являющегося высокоонкогенным. Используется в ситуациях, когда врач подозревает наличие вируса высокой степени риска. Итог исследования имеет формулировки «не обнаружен», «обнаружен штамм 16», «обнаружен ВПЧ, в том числе штамм 16».

ВКР-скрининг — массовая плановая диагностика на папилломавирус с целью раннего выявления

ВКР-скрининг — что это такое и как проводится

ВКР-скрининг — массовая плановая диагностика на папилломавирус с целью раннего выявления. В исследовании на ВПЧ ВКР у женщин участвуют лица старше 25 лет (по некоторым данным — с 21 года/спустя 3 года после начала половой жизни; при сильной сексуальной активности, большом количестве партнеров — с 18 лет). Рекомендуется проходить 1 раз в 3 года в ходе диспансеризации. В процессе мероприятия выявляются вирусы высокого риска, представляющие опасность тем, что могут вызывать развитие рака шейки матки. Определение концентрации ДНК при ВПЧ высокого онкогенного риска проводится методом ПЦР.

Этапы скрининга:

• Мазок на цитологию по Папаниколау (ПАП-тест). Для проведения теста берут материал из канала шейки матки (зоны трансформации — места перехода цилиндрического эпителия в многослойный плоский) в ходе осмотра, который наносят на стекло/в емкость со специальной жидкостью (тогда забор мазка производят щеточкой). Затем материал после окрашивания изучают под микроскопом на наличие атипичных клеток, если они есть — тест положительный. Метод также называют цитологическим.
• ПЦР — определение наличия вируса. Реакцию проводят тем, у кого получен положительный результат ПАП-теста. Для исследования можно применять материал мазка, кровь, мочу.
• Расширенный скрининг — определение типа и количества ВПЧ высокого риска онкогенности (Дайджин-тест — число вирусных тел на 100тыс. клеток: до 3 — концентрация малая, 3-5 — средняя, больше 5 — высокая).

Забор материала осуществляют как для ПАП-теста.

Правила подготовки к сдаче

За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса

• За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса, приема любых медикаментов, спринцевания, вагинальных свечей, таблеток.
• Мазок на ПЦР сдают в первую фазу цикла, после менструации.
• В период обострения хронических инфекционных патологий, после приема антибиотиков забор материала не проводится.

Правила сдачи крови/мочи:

• Кровь — сдается из вены утром натощак, за несколько дней до анализа из рациона исключают аллергены (шоколад, цитрусовые и т.д.).
• Моча — для анализа ПЦР на ВПЧ нужно сдать натощак утреннюю мочу (последний прием пищи — 8 часов назад) в стерильный контейнер. Доставить контейнер в лабораторию нужно в течение 4 часов после забора материала.

Как сдавать мужчинам и женщинам

Для исследования возможно использование практически любого человеческого биоматериала — крови, мочи, мазка, соскоба. Правила сдачи крови и мочи у мужчин и женщин не отличаются.

Отличается методика взятия мазка:

• Как сдавать анализ женщине — соскоб делается щеточкой, круговым поступательным движением из мочеиспускательного канала/ влагалища/цервикального канала.
• Мужчине — соскоб щеточкой делают с головки члена, мочеиспускательного канала.

Перед забором мазка нужно обеспечить соблюдение правил личной гигиены.

Расшифровка результатов

Трактовка полученных результатов проводится в зависимости от использованного метода:

• Качественный — наличие/отсутствие — «обнаружен»/»не обнаружен».
• Генотипирование — обнаружение какого-либо конкретного штамма — «обнаружен»/»не обнаружен».
• Комбинированный — обнаружение 16 штамма — «не обнаружен», «обнаружен штамм 16», «обнаружен ВПЧ, в том числе штамм 16».
• Количественный:

Подсчет количества вирусных тел на 100 тыс. клеток биоматериала (соскоба):

• <3 — содержание низкое (вероятность рака низкая)
• 3-5 — средняя
• >5 — высокая (высокая вероятность рака)

Методы лечения

Для лечения ВПЧ применяют противовирусные препараты

• Хирургический — удаление папиллом, кондилом, бородавок:
• Лазером (лазерная деструкция/коагуляция).
• Радиоволновым излучением.
• Электроножом.
• Прижигание бородавок жидким азотом (криодеструкция).
• Применение средств, действующих локально, для некротизации патологических элементов — веррукацид, суперчистотел, подофиллотоксин 0,5%. После проведения хирургического лечения назначают противовирусные, иммуномодулирующие препараты.
• Противовирусные препараты — Изопринозин, Виферон, Панавир, Генферон, Кипферон.
• Укрепление иммунитета — Иммунал, Полиоксидоний, Галавит.

Противовирусные и иммуностимуляторы выпускаются в форме таблеток, свечей. Длительность курса определяется лечащим врачом, как правило, 10-14 дней, по необходимости продляется.

При изъязвлении/воспалении образований проводят противовоспалительное лечение — обработка антисептиками (например, хлоргексидином, мирамистином), антибиотиками, противовирусными мазями. Сильно воспаленную папиллому лучше удалить хирургически.

Возможно использование народных методов лечения после консультации с лечащим врачом. Народные методы лечения имеют 2 направления:

1. Удаление образований. Наружно используется настойка чистотела, сок одуванчика/сырого картофеля — смазывать дважды в сутки. Папиллома отпадает примерно через 1,5-2 месяца.
2. Укрепление иммунной системы — можно проводить на протяжении всего заболевания. Рекомендуют:

• Отвары — еловой хвои/лука репчатого с добавлением меда.
• Чаи — шиповник, мелисса, иван-чай, мята, липовый цвет, кориандр.
• Сухофрукты — смесь из грецких орехов, сушеных абрикосов, изюма, лимона с медом.

Видео

Анализ ПЦР на ВПЧ.