Пцр на определение впч
Автор статьи
Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.
Общие сведения
Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.
Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:
- наличие ВПЧ;
- штаммы, которыми инфицирован больной;
- количественное содержание вируса в организме.
Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.
Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.
Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.
Показания для анализа
Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. 
ВПЧ распространяется следующими путями:
- при незащищенных половых контактах;
- при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
- контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
- во время тесного контакта с кожей больного.
Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу. 
Преимущества метода
ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:
- Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
- Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
- Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
- Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.
Недостатки метода
Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.
Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.
Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:
- собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
- нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
- реагенты были непригодными.
Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.
Виды методик
В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.
Качественный способ
Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.
Генотипирование
Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».
Комбинированный метод
Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.
Количественный метод
Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.
Как сдавать анализ
Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.
Как сдают анализ мужчины
Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.
Как сдают анализ женщины
Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.
Забор биоматериала
Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.
Расшифровка анализа ПЦР
В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.
Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:
- Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
- Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
- Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.
В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.
Источник
Вирус папилломы человека присутствует у многих людей. Чтобы обнаружить его, необходимо сдать ПЦР на ВПЧ. С помощью этого исследования возможно выявить наличие вируса, количество и генотип. Этот метод считается точным и надежным, так как исследование с помощью полимеразной цепной реакции дает достоверный результат. Вирус папилломы иногда находится в неактивном состоянии, поэтому при наличии хоть одного симптома такого заболевания для подтверждения диагноза проводят исследование методом ПЦР.
ПЦР-тест позволяет узнать наличие вируса папилломы, а так же его тип и степень угрозы здоровью.
Общие сведения
ПЦР метод предполагает выделение в ДНК пациента чужеродной ДНК. Дело в том, что эти клетки состоят из объединенных четырех нуклеотидов. Согласно основному правилу генетики, они располагаются в определенном порядке. ДНК инородного микроорганизма нарушает этот порядок, что позволяет выявить его даже малейшую частицу. Анализ на ПЦР проводится с присоединением возбудителя ВПЧ к ДНК обследуемого, что, приводит к стремительному делению клеток. ПЦР является достаточно распространенным анализом. Этот метод очень точен и способен определить наличие ВПЧ даже в инкубационный период. При помощи ПЦР можно выяснить:
- есть ли у человека папилломавирус;
- какой штамм инфекции;
- какое количество ВПЧ в крови.
В норме считается, что небольшое количество вируса папилломы человека присутствует, поэтому его обнаружение не количественным способом не результативно. Диагностическое значение имеет определение количества ВПЧ, а также его подтипа, который бывает как безопасным для здоровья, так и онкогенным. Чтобы обезопасить себя от возможных негативных последствий, важно вовремя сделать исследование ПЦР на вирус папилломы человека, проконсультироваться с врачом и начать необходимое лечение.
Вернуться к оглавлению
Показания
Наличие бородавок – повод пройти тест ПЦР.
Заразиться ВПЧ возможно только от другого человека. Патогенный микроорганизм, попадая в кровь, размножается в верхних слоях кожных покровов, что приводит к характерным проявлениям — образованию папиллом или кондилом. Так как заболевание очень распространено и наблюдается практически у 80% населения, вероятность заразиться им высока. Папилломавирус передается при помощи таких путей:
- незащищенный половой акт;
- во время поцелуя;
- ребенку от мамы при родах;
- бытовым путем;
- при тесных соприкосновениях кожи.
В основном показаниями для проведения ПЦР ВПЧ являются кожные признаки заболевания, которые выглядят как бородавки на тонкой нитеобразной ножке. Даже если характерных кондилом на коже не наблюдается, вирус все равно может присутствовать в крови, но протекать бессимптомно. Если обнаруживаются папилломавирусные инфекции 16-го и 18-го подтипов, необходимо регулярно посещать гинеколога или уролога, проходить диагностическое обследование и сдавать анализ на ВПЧ. Только благодаря своевременному обращению к врачу имеется возможность не дать развиться этой коварной болезни.
Вернуться к оглавлению
Как сдавать: подготовка к обследованию
Специальной схемы подготовки к ПЦР исследованию нет. Такая диагностика предполагает взятие соскоба из уретры у мужчин. Женщины с целью определения ВПЧ сдают мазки, которые в последующем отправляют на ПЦР исследование. В связи с этим, единственной подготовкой к обследованию с помощью ПЦР является то, что перед прохождением анализа следует постараться не мочиться в течение двух часов. К особенностям такой диагностики относят то, что в течение трех дней перед ее прохождением важно воздержаться от половых контактов и принятий алкогольных напитков. Кроме основных пунктов подготовки, делая скрининг на ВПЧ, не следует забывать об интимной гигиене, впрочем, как при подготовке к любым гинекологическим манипуляциям.
Вернуться к оглавлению
Взятие биоматериала
От того, насколько качественно взят биоматериал, зависят результаты обследования ПЦР. Ведь если нарушится стерильность, в материал попадут инородные вещества или при заборе будет взято недостаточное количество анализируемых клеток, исследование будет проведено с нарушениями. Поэтому чистота, внимательность и качественное проведение анализа — это залог достоверности показателей.
Вернуться к оглавлению
Процедура у женщин
Перед тем как сделать соскоб, женщине с помощью стерильного раствора обрабатывают шейку метки. После этого, специальной щеточкой берут мазок из внутреннего канала. Делают это с помощью специального зонда или щеточки. У женщин это приспособление вводится на глубину 1-го сантиметра, после чего в течение 3-х секунд врач вращает его, совершая соскоб со стенок шейки матки. Потом аккуратно, не задевая стенок влагалища, доктор достает щеточку и помещает в заранее подготовленную пробирку. В течение 15-ти секунд она находится там, потом осторожно обтирается об стенки пробирки и извлекается. Пробирка закрывается и направляется на последующее проведение исследования.
Вернуться к оглавлению
Процедура у мужчин
Процедура у мужчин схожа. Прежде всего врач обрабатывает при помощи физиологического раствора головку полового члена вместе с отверстием мочеиспускательного канала. Щеточка вставляется на большую глубину, около 4-х сантиметров. Потом проводящий анализ вращает зонд, собирая биоматериал со стенок уретры. После неприятной процедуры щеточка помещается в пробирку и передается далее на лабораторное исследование. Готовый биоматериал имеет срок годности хранения при комнатной температуре, который составляет двое суток. Существует показатель контроля взятия материала, который обязательно указывается в бланке и подразумевает правильность и качественность проведения урогенитального соскоба.
Показатель контроля взятия биоматериала должен быть не менее 4-х единиц, если же он ниже — анализ нельзя считать достоверным и его нужно сдать еще раз.
Разработаны четыре методики проведения ПЦР тестирования на ВПЧ.
Вернуться к оглавлению
Виды методик
Анализ ПЦР проводится с помощью разных способов определения ВПЧ. Каждый из них характеризуется своими особенностями и отличается точностью проводимого исследования. Среди таких выделяют 4 метода:
- качественный метод;
- генотипирование;
- комбинированный способ;
- количественный.
Вернуться к оглавлению
Качественный способ
Такой метод ПЦР характеризуется выявлением высокого канцерогенного риска ВПЧ. Практикуется использование его вместе с другими способами определения вируса. Главным недостатком качественного метода определения ВПЧ является то, что с его помощью нельзя установить тип возбудителя, а возможно лишь подтвердить факт заражения. Качественный метод способен показать наличие вируса от 14-го до 21-го генотипа. В бланке указывается две оценки: «обнаружено» и «не обнаружено». В первом варианте подразумевается, что в анализируемом биоматериале было найдено ДНК ВПЧ, во втором — эти же клетки отсутствуют.
Вернуться к оглавлению
Методика с генотипированием
Методика ПЦР с генотипированием позволяет выявить опасный тип ВПЧ и возможный рецидив.
Следующий способ ПЦР, метод с генотипированием, способен определить тип вируса. Это важно для прогнозирования и последующего лечения, так как 16 и 18 тип папилломавируса может стать причиной развития онкологических заболеваний. Если обнаруживаются такие типы, в обязательном порядке проводят кольпоскопию и цитологию урогенитальных клеток.
Генотипирование проводят тогда, когда важно отличить, произошло повторное заражение вирусом или он остался. Считают, что ВПЧ выжил после проведенного лечения, если в анализе ПЦР повторно определяется тот же генотип. Но если в исследовании обнаруживается другой тип вируса, то это говорит о повторном инфицировании ВПЧ. У семейной пары иногда определяют разные типы ВПЧ, что возможно в том случае, когда два организма по-разному освобождаются от вируса. В готовом бланке по каждому генотипу ВПЧ указывается ответ: «обнаружено» или «не обнаружено».
Вернуться к оглавлению
Комбинированный метод
Комбинированный способ состоит из качественного определения 16-го типа папилломавируса вместе с генотипированием. Ответ возможен в таких 3-х вариантах:
- не обнаружено;
- обнаружено, в том числе вирус папилломы человека 16-го типа;
- обнаружено 16 тип папилломавируса.
В первом варианте — ДНК ВПЧ указанного типа не было найдено в биоматериале. Второй вариант означает, что кроме 16-го типа присутствуют еще другие генотипы ВПЧ. И последний вариант указывает на присутствие только 16-го типа ВПЧ. Комбинированный способ ПЦР очень важен в диагностике, так как определяет наличие одного из самых опасных подтипов папилломавируса, который приводит к развитию раковых опухолей.
Вернуться к оглавлению
Количественное определение без генотипирования
Методика ПЦР без генотипирования даёт возможность увидеть развитие раковых новообразований.
С помощью такого метода определяют количество ВПЧ в анализируемом биоматериале. Полученная информация свидетельствует о тяжести инфицирования, помогает сделать прогноз и подобрать схему лечения. Определить количество возможно 16-го и 18-го генотипа ВПЧ, что немаловажно в медицинской диагностике. Такой вид ПЦР указывает на количество клеток вируса среди взятых 100 тысяч. Если в бланке пишется, что найдено более 5-ти клеток в поле зрения, то это говорит о повышенной концентрации ВПЧ и риске развития злокачественных образований. При малозначимом количестве ВПЧ указывается значение менее 3-х.
Вернуться к оглавлению
Расшифровка ПЦР
Расшифровывать результаты анализов должен врач. Но пациенту тоже важно знать о структуре бланка результатов и как правильно интерпретировать показатели. Однако помните, что найденная информация в интернете — ознакомительная. Ставить самостоятельно диагноз с его помощью не нужно. Если в анализе указано «ДНК не обнаружено», значит папилломавирус в крови отсутствует. Если показатель Lg 5 и больше, это свидетельствует о его высокой концентрации в крови, Lg 3−5 — о значимом количестве, менее 3-х — о незначительном. Подробную информацию о типе ВПЧ и схему лечения дает лечащий доктор.
ВПЧ способен вызвать рак шейки матки у женщины и другие злокачественные образования. Для мужчин этот микроорганизм тоже опасен, вплоть до развития онкологии. Папилломы, которые вырастают в мочеиспускательном канале способны привести к перекрытию просвета и вызвать импотенцию и бесплодие. Врачи заметили, что до 30-ти лет заболевания, которые вызваны ВПЧ, спонтанно регрессируют. Однако в пожилом возрасте обратное развитие происходит редко. Поэтому важно вовремя сдать анализы, правильно их расшифровать и начать лечение.
Вернуться к оглавлению
Преимущества и недостатки
ПЦР диагностика ВПЧ является одним из самых востребованных в медицине способом обнаружения папилломавируса в крови у человека. Полимеразная цепная реакция используется не только для обнаружения ВПЧ и определения его генотипа, но и при диагностике других заболеваний. Этот метод обладает множеством преимуществ перед другими при наличии всего нескольких недостатков.
| Преимущества и недостатки ПЦР | |
| Преимущества | Недостатки |
|
|
ПЦР показывает наличие ВПЧ и его тип, но оно может дать ложный результат при проведении процедуры у человека, уже болевшего данным заболеванием.
ПЦР чувствителен к живым и мертвым бактериям. Это означает, что у человека, который раннее болел ВПЧ и излечился, все равно присутствует ДНК погибших микроорганизмов. Из-за такой повышенной чувствительности возможен ложный положительный результат. Чтобы анализы были качественными и достоверными, лаборатория нуждается в квалифицированном персонале и обязательной сертификации.
Источник
