Определение методом пцр днк вирусов папилломы человека

Определение методом пцр днк вирусов папилломы человека thumbnail

Определение методом пцр днк вирусов папилломы человека

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

анализ пцр на впчАнализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

  • наличие ВПЧ;
  • штаммы, которыми инфицирован больной;
  • количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.штаммы вируса папилломы человека

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. папилломы у мужчин и женщин ВПЧ распространяется следующими путями:

  • при незащищенных половых контактах;
  • при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
  • контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
  • во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  фото: впч высокого онкогенного риска у женщин

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

  1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
  2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
  3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
  4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.
Читайте также:  вирус папилломы человека как лечение народными средствами

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

  • собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
  • нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
  • реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

взятие мазка у мужчинГоловка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Читайте также:  Реферат на тему папиллома

Как сдают анализ женщины

взятие мазка у женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

фото: данные пцр исследования

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

  • Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
  • Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
  • Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Источник

ПЦР – это метод молекулярной биологии для диагностики, в том числе половых инфекций. ПЦР на ВПЧ — это эффективный способ выявления заболевания в организме. С его помощью обнаруживают тип и количество вируса, определяется канцерогенность штамма. Информация анализа важна для выбора метода лечения заболевания.

лаборант смотрит в микроскоп

Что такое полимеразная цепная реакция

Основополагающий момент — неоднократное удвоение участка ДНК ферментами, используя искусственные условия. Итогом анализа считается наработка количества ДНК, необходимого для сравнения эталонов с обнаруженными фрагментами. Процесс увеличения количества копий ДНК называется амплификацией. Часто используется ПЦР для выявления ВПЧ.

Метод имеет широкое применение в биологии и медицине. Это диагностика инфекционных и наследственных заболеваний, установление отцовства, введение мутаций, клонирование имеющихся и создание новых генов. В таблице приведен список диагностируемых болезней данным способом.

Сфера заболеванийЗаболевание
Клиника инфекционных и вирусных заболеваний.Сальмонеллез, дифтерия, гепатиты B, C, G, ВИЧ.
Практика урологии и гинекологии.Герпес, уреаплазмоз, хламидиоз, ВПЧ.
Пульмонология.Туберкулез, пневмония.
Гастроэнтерология.Хеликобактериоз.
Гематология.Цитомегаловирусные инфекции, онковирусы.

ПЦР была изобретена американским ученым и нобелевским лауреатом Кэри Мюллисом в 1983 году.

Эффективность использования метода ПЦР на выявление ВПЧ

Эффективность метода полимеразной цепной реакции заключается в том, что он способен выявить симптомы вируса папилломы высокого канцерогенного риска (ВКР). Происходит выявление ДНК самого возбудителя, причины, а не симптомов присутствия вируса. Выявление штаммов ВПЧ максимальной канцерогенности является отличным показателем. Можно назвать данный способ достоверным.

Исследование на молекулярном уровне позволяет:

  • обнаружить инфекцию с максимальной точностью по пробе ДНК (суть использования ДНК в закодированной в ней индивидуальной генетической информации для каждого рода вирусов);
  • подсчитать количество вирусов или бактерий;
  • выявить схожие архитектуры клеток зараженных частиц;
  • в короткий срок получить результат (несколько часов).

ПЦР диагностика ВПЧ применяется для анализа на количество папилломавируса. Доктора доверяют этому методу.

мужчина закрыл глаза рукой

Преимущества и недостатки ПЦР

Высокий уровень эффективности ПЦР подразумевает некоторое количество плюсов метода исследования:

  1. Тест позволяет отделить следы инородной ДНК от исследуемой.
  2. Высокий процент производительности, быстродействие процесса получения результата исследования. Пациенту не надо долго ждать результата.
  3. Существует возможность сделать анализ сразу на несколько заболеваний. Достоверность результата не будет подвержена влияниям.
  4. Высокая сенситивность. Вирус обнаруживается даже в начальный период развития, при малой концентрации. Благодаря методу начинается своевременное лечение.

Недостатки ПЦР на выявление ВПЧ:

  1. После проведения лечения в тканях до определенного времени остаются мертвые клетки. Если до их обновления провести процедуру ПЦР, то анализ даст положительную реакцию – мертвые клетки обозначатся как живые. Это происходит по причине, что цель метода – найти вирусные ДНК даже у неживых клеточных элементов. Повторный анализ следует проводить не ранее трех месяцев после первичного.
  2. Лабораторный просчет от неправильной транспортировки и нарушения условий хранения материала, непригодности реагентов и нарушения стерильности.
Читайте также:  Рана после удаления папилломы покрылась белым налетом

Насколько достоверны результаты

Результаты анализа на ВПЧ достоверны. Повторный не нужен. Но, если пациент решится на вторичную сдачу, то необходимо подождать 2-3 месяца. В противном случае можно неверно информировать человека о ложноположительном результате.

Нуждаетесь в совете опытного врача?

Получите консультацию врача в онлайн-режиме. Задайте свой вопрос прямо сейчас.

Задать бесплатный вопрос

На точность результата может повлиять повреждение собранного материала для процедуры, нарушение стерильности.

Для наибольшей точности результата анализа при определенной задаче необходимо использовать свой тип ПЦР. Качественный способ применим для подтверждения или опровержения существования вируса в организме (штамм ВПЧ не установлен). Методика генотипирования позволяет установить вид инфекции и выяснить не осталась (или не появилась ли вновь) чужеродная ДНК. Комбинированный или комплексный метод применим при ПЦР на наличие ВПЧ высокого онкогенного риска. Наиболее информационный количественный метод – помогает определить степень тяжести.

Подготовка к обследования на ВПЧ

Важно выбрать клинику, где проходить обследование ПЦР на наличие ВПЧ, от профессионализма и добросовестности специалиста будет зависеть результат исследования.

Подготовка к сдаче анализа на вирус папилломы заключается в соблюдении нескольких условий:

  • воздержание от мочеиспускания за 3 часа до процедуры;
  • 2–3 дня не вступать в половой контакт;
  • соблюдение интимной гигиены;
  • 3 дня не употреблять алкоголь;
  • женщинам анализ следует проходить до либо по прошествии 2-х дней после менструации;
  • приостановить употребление антивирусных препаратов;
  • процедура должна проводиться натощак (с утра ничего не есть).

доктор консультирует мужчину

Как сдать анализ ПЦР на папилломавирус

Заразиться можно только при тесном контакте с инфицированным больным. При попадании вируса в кровь, начинается размножение его в верхних слоях кожного покрова человека. Это и есть характерные признаки папиллом и кондилом.

Причины попадания вируса в эпителиальный слой:

  • при совершении полового акта с инфицированным человеком;
  • путем общего использования предметов бытовой принадлежности (одежда, зубная щетка, личные вещи);
  • во время естественных родов. Вирус передается ребенку от матери, зараженной вирусом;
  • при соприкосновении к коже больного.

На сдачу анализа на ВПЧ может отправить лечащий врач гинеколог (для женщин) и уролог (для мужчин).

У мужчин берут специальную щетку и вставляют приблизительно на 4 сантиметра в уретру. Для сбора необходимого материала щетка соскобом должна совершать легкие вращения. Материал для исследования помещают в пробирку и отправляют в лабораторию. Время хранения полученного материала ограничено двумя сутками.

Анализ ПЦР на наличие ВПЧ для женщин отличается. Из канала шейки матки берут мазок при помощи специальной щетки и помещают в пробирку. Следующий этап – отправка материала на исследование.

Расшифровка результатов ПЦР

Расшифровка результатов проведения полимеразной цепной реакции обязанность компетентного специалиста – врача. Пациенту полезно знать информацию о правильной интерпретации показателей. Но стоит учесть важный момент. Сейчас много информации по «декодировке» итогов исследования можно найти на интернет-сайтах. Не следует доверять ей на 100%. Эта информация только ознакомляет, не является инструкцией для профессионального использования.

Папилломавирус отсутствует в крови при указании в распечатке анализа «ДНК не обнаружено». Результат ПЦР на наличие ВПЧ отрицательный. Положительный результат характерен тремя следующими показателями. Если показатель менее Lg3, то в незначительном количестве, следует задуматься об образе жизни и повышении иммунитета. При отметке, находящейся между Lg3 и Lg5, концентрация вируса высокая. Необходимо серьезно заняться лечением. При результате большем Lg5, нужно обратиться к онкологу, данный результат имеет критическую оценку.

При отсутствии симптомов назначают скрининг – обследование для выявления случаев заболевания, микрорентген.

ПЦР на наличие ВПЧ с расшифровкой позволяет с максимальной точностью определить наличие вируса папилломы. Восприимчивость к вирусу зависит от генотипа организма.

Статья прошла проверку редакцией сайта

Источник