Комплексное генотипирование днк впч
Вирус папилломы человека считается одним из наиболее распространённых заболеваний, включающих в себя более 100 различных типов. Большинство из них малоопасны для человека и при хорошем состоянии организма могут быть нейтрализованы работой иммунной системы. Однако существуют штаммы ВПЧ, вызывающие серьезные кожные поражения и отличающиеся высоким уровнем онкогенности:
Для выявления типов вируса существует процедура генотипирования, позволяющая не только диагностировать наличие инфекции, но и дать прогноз относительно развития заболевания. Благодаря этой процедуре лечащий врач может подобрать тактику лечения, подходящую для конкретного типа.
Что это такое
Под «генотипированием» понимается не конкретная процедура, а ряд диагностических мер, нацеленных на определение типа ВПЧ, концентрации вируса в организме. Тесты могут определить сразу несколько штаммов, что характерно для подобной инфекции. В таком случае обычно говорят о более сложном течении болезни.
Обычно диагностика не ограничивается только генотипированием: лечащим врачом также проводится внешний осмотр, при необходимости сдаётся кровь, у женщин выполняется кольпоскопия и т.д. Однако именно генотипирование является основным способом определить наличие ВПЧ. Такой метод очень чувствителен к минимальным изменениям в концентрации вируса, поэтому легко позволяет выявить отклонения.
Определение типа ВПЧ
Процедура диагностики проводится в несколько этапов. После консультации врачу необходимо подтвердить наличие вируса, и только после этого проводится типирование. Перед самим тестом пациенту предстоит пройти несколько процедур:
После подтверждения присутствия ВПЧ в организме врачом может быть назначен мазок или соскоб, необходимый для теста ПЦР.
В случае если инфекция уже проявила себя в виде новообразований, дополнительные методы диагностики обычно не применяются. В зависимости от обнаруженных вирусных штаммов назначается специфическое лечение, обычно включающее в себя удаление имеющихся наростов.
Особенности типов вируса
Все типы папилломавируса делятся на несколько больших групп, исходя из степени онкогенности, т.е. риска развития злокачественных новообразований. Чем более высокая степень, тем большему риску подвергается больной с уже имеющимися доброкачественными папилломами. Выделяют следующие классификации HPV (обозначение ВПЧ в анализах):
- Высокоонкогенные. Риск развития злокачественной опухоли в пораженной области очень высок. К таким типам HPV относятся 16, 18, 31, 33, 45, 50 штаммы. Они обычно проявляются остроконечными кондиломами, образующимися в области половых органов больного.
- Среднеонкогенные. Развитие злокачественной опухоли происходит примерно в половине случаев среди всех инфицированных. В эту группу входят 26, 30, 35, 65 штаммы.
- Низкоонкогенные. Эти типы ВПЧ обычно проявляются в форме бородавок, что считается довольно безвредным, хоть и неприятным косметическим дефектом. К ним относятся 6, 11, 13, 32, 40 штаммы. Развитие раковых заболеваний с такими формами вируса практически невозможно.
Среди всех типов HPV больше всего выделяются 16 и 18 штаммы. Они представляют наибольшую опасности для женщин: в 80% случаев у больных раком шейки матки был диагностирован один из этих типов ВПЧ. Такие формы вируса считаются наиболее агрессивными, поэтому при диагностировании требуют незамедлительного лечения.
Способы диагностики
Для проведения диагностики пациент может обратиться к гинекологу, урологу, проктологу, дерматологу или даже к терапевту, если не уверен в природе появления своих наростов. Врач может дать первичное заключение, исходя из внешних признаков проявления вируса, однако для прояснения деталей назначаются разные типы исследований. К ним относятся:
- Кольпоскопия. Благодаря кольпоскопу гинеколог способен многократно увеличивать изображение, показывающее слизистую оболочку половых органов изнутри. Процедура позволяет детально рассмотреть влагалище и шейку матки, благодаря чему врач может заметить появление даже мелких новообразований. Особенности протекания ВПЧ таковы, что наросты могут образовываться даже на внутренних половых органах, поэтому исследование кольпоскопом является обязательным этапом диагностики.
- Цитология. Этот метод исследования основан на взятии мазка с пораженной оболочки места воздействия вируса. После забора мазок исследуется под микроскопом и проверяется на наличие злокачественных клеток. Результаты цитологии расшифровываются следующим образом: 1-2 группа говорит об отсутствии патологии, 3 показывает необходимость других исследований, так как диагноз под сомнением, 4-5 группа свидетельствует о наличии злокачественных изменений.
- Гистология. Для процедуры также берут частичку биоматериала с определенного участка тела, после чего данные исследуются под микроскопом. Отличие этого метода от предыдущего в том, что анализу подвергается не мазок, а небольшой кусочек нароста. Так можно более наглядно увидеть, происходят ли онкологические изменения на конкретном участке.
- ПЦР-диагностика. Один из наиболее распространенных анализов, основанный на взятии мазка из влагалища или уретры. Метод считается довольно чувствительным и позволяет выявить не только наличие вируса, но и определить конкретные штаммы. Также ПЦР тест используют для отслеживания концентрации вируса, что помогает увидеть, насколько эффективным было лечение.
- Digene test. Предназначен преимущественно для скрининговых обследований женщин, так как эффективно выявляет предраковое состояние. Материал для забора – мазок, взятый из влагалища. Также тест может использоваться в качестве дополнительного исследования, уточняющего результаты других тестов.
Каждый тест необходимо выполнять только под наблюдением специалиста. При несоблюдении правил проведения диагностики существует вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата, причем последний встречается чаще.
Видео от нашего практикующего дерматовенеролога:
Особенности обследования у мужчин и женщин
Принцип действия каждого теста генотипирования одинаков и основан на заборе небольшого количества клеток с пораженного места. Различается только способ забора материала. Женщины обычно сдают на анализ соскоб, берущийся из шейки матки. Такой материал считается самым информативным, в отличие от соскоба из влагалища. Для этого врач берет небольшую щетку, щетинки которой предназначены специально для забора материала из цервикального канала.
После этого материал отправляется на изучение в лабораторию. Такая манипуляция не должна причинять женщине неудобства. Единственным противопоказанием для неё является наличие менструации.
Материал для изучения у мужчин берется из уретры. С помощью небольшого зонда врач берет соскоб эпителия, который после извлечения остается на специальном стекле. В таком виде анализ отправляется на исследование. При диагностике ВПЧ мужчинам обычно назначают тест ПЦР.
Принцип лечения
Полное излечение пациента от папилломавируса невозможно даже при грамотном, своевременно назначенном лечении. ВПЧ всегда будет присутствовать в организме в скрытой форме и сможет проявить себя в виде рецидива на фоне сильного стресса или ослабленного иммунитета. Поэтому принципы терапии основаны не на полном излечении инфекции, а на минимизировании последствий инфицирования. В рамках терапии для этого используется:
- удаление всех новообразований (конкретный способ пациенты должны обговаривать с лечащим врачом, так как разные типы наростов требуют разных подходов);
- применение иммуностимулирующих средств;
- назначение противовирусных препаратов.
В совокупности все эти методы помогают держать под контролем концентрацию вируса в организме, а регулярное генотипирование отслеживает вирусную нагрузку.
Лечение важно проводить исключительно под контролем врача, так как необходимо смотреть на реакцию организма, которому могут не подойти назначаемые лекарства. Домашнее самолечение в виде прижигания папиллом, использование чистотела и т.д. может оказаться очень опасным. Больной может не знать, что его новообразование переродилось в злокачественное, а самостоятельная попытка удалить раковые клетки может привести к летальному исходу.
Цена на анализы
Стоимость процедур зависит от места проживания и может существенно разниться от региона к региону. Усредненные цены на диагностику вируса выглядят следующим образом:
- количественный ПЦР тест с определением 12 генотипов вируса – 600-800 рублей;
- идентификация отдельно взятых штаммов ВПЧ – 250-350 рублей;
- кольпоскопия – 900-1400 рублей;
- цитология – 700-1200 рублей;
- Digene-тест на определение высокоонкогенных штаммов вируса – 5000-6000 рублей;
- гистологическое исследование – 2000-3000 рублей.
Подбирать способ диагностики больному следует совместно с лечащим врачом, так как каждая ситуация требует индивидуального рассмотрения. Кроме того, необходимо через некоторое время повторно провести диагностику для анализа качества проведенного лечения.
Источник
Диагностическое направление
Онкоскрининги
Общая характеристика
Комплексное генотипирование ДНК ВПЧ определение 19 высокоонкогенных 16,18,31,33,35,39,45,52,56,58,59, 26,51,53,66,68,69,73,82 и 9 низкоонкогенных: 6,11,40,42,43,44,54,61,70.
ВПЧ-инфекция является очень распространённой (около 75-80% женщин в течение своей жизни по крайней мере единожды подвергается воздействию вируса).
Описано около 150 типов ВПЧ.
Большинство случаев ВПЧ-инфекции связано с началом сексуальной активности и являются транзиторными, хотя в некоторых случаях ВПЧ-инфекция остаётся латентной и может активироваться через несколько лет.
В течении двух лет после инфицирования самостоятельно происходит элиминация вируса до 80-90%.
По истечении этого срока при оставшейся хронической инфекции незначительное количество ВПЧ прогрессирует и приводит к развитию цервикальной интраэпителиальной неоплазии (дисплазии), а затем – рака шейки матки.
Определение типа вируса позволяет оценить степень риска развития неоплазии и дифференцировать персистенцию вируса от случая нового заражения при динамическом наблюдении.
Высокая вирусная нагрузка рассматривается как один из факторов, снижающих спонтанную элиминацию вируса и увеличивающих риск развития неоплазии.
Выполняется анализ методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) с детекцией результатов в режиме реального времени (RЕАL TIME).
Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов ПЦР и автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов.
Показания для назначения
1. В комплексе с цитоморфологическим исследованием с окраской мазков по Папаниколау – для проведения скрининга рака шейки матки.
2. Патология шейки матки: доброкачественные патологические процессы (воспаление, эктопия, эрозия) и предраковые изменения (лейкоплакия, дисплазия различной степени, полипы).
3. Генитальный кондиломатоз.
4. Контроль эффективности лечения.
Маркер
Маркер наличия возбудителя ВПЧ в исследуемом биоматериале.
Клиническая значимость
1. Оценка прогноза онкогенного потенциала. Риск прогрессии ВПЧ – инфекции, дисплазий возрастает при:
• Определении ВПЧ в количестве “”++””: 6,5 ~ 3,5 lg ГЭ/образец и более
• Выявлении 16 и/или 18 генотипов ВПЧ
• Одновременном выявлении нескольких генотипов ВПЧ (в различной комбинации)
Состав показателей:
Генотип. ВПЧ 19 высокоонкогенных типов 16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,69,73,83
Метод:
Полимеразная цепная реакция в реальном времени
Диапазон измерений:
2*103
Единица измерения:
геномных эквивалентов/образец
Генотип. ВПЧ 9 низкоонкогенных типов 6,11,40,42,43,44,54,61,71
Метод:
Полимеразная цепная реакция в реальном времени
Диапазон измерений:
2*103
Единица измерения:
геномных эквивалентов/образец
Выполнение возможно на биоматериалах:
Биологический материал
Условия доставки
Контейнер
Объем
Соскоб из уретры
Условия доставки:
48 Час. при температуре от 2 до 25 градусов Цельсия
Контейнер:
Эппендорф с транспортной средой
Соскоб из ЦК, шейки матки, зоны поражения
Условия доставки:
48 Час. при температуре от 2 до 25 градусов Цельсия
Контейнер:
Эппендорф с транспортной средой
Соскоб слиз.оболочки канала шейки матки
Условия доставки:
48 Час. при температуре от 2 до 25 градусов Цельсия
Контейнер:
Контейнер с консервантом SurePath
Соскоб из ротоглотки
Условия доставки:
Не хранится
Контейнер:
Эппендорф с транспортной средой
Соскоб с задней стенки влагалища
Условия доставки:
Не хранится
Контейнер:
Эппендорф с транспортной средой
Соскоб с задней стенки влагалища
Условия доставки:
Не хранится
Контейнер:
Контейнер eNAT COPAN
Правила подготовки пациента
Забор биоматериала у женщин: соскоб из цервикального канала, шейки матки, очага поражения.
Забор биоматериала у мужчин: соскоб из уретры, крайней плоти.
Стандартные условия: В течение рабочего дня МЛ “ДІЛА”.
Важно:
• На протяжении 2-х суток перед забором материала не применять препаратов местного значения (свечи, спринцевания и др.), воздержаться от половых контактов
• Сдавать до лечения или не раньше, чем через 21 день после окончания курса антибактериальной, антимикотической терапии (если другое не определено лечащим врачом).
Возможно: Возможны отклонения от стандартных условий по согласованию с врачом.
Вы можете добавить данное исследование в корзину на этой странице
Интерференция:
- Не обнаружена.
- Не обнаружена.
Интерпретация:
- Положительный результат: концентрация выдается в «+»:+++ >105 копій/реакцію >6,5 lg.++ 105-102 копій/реакцію 6,5-3,5 lg.+ <102 копій/реакцію <3,5 lg. При обнаружении в ходе диагностики или мониторинга клинически значимых типов ВПЧ дальнейшее ведение пациентов осуществлять в соответствии с методическими рекомендациями для врачей.
- Отрицательный результат: ДНК вируса папилломы, связанного с риском развития рака шейки матки, не выявлено.
Источник
При инфицировании папилломавирусом врач предложит пациенту пройти комплексное обследование. В обязательную программу входит тест на генотипирование ВПЧ. Исследование позволяет выявить вид вируса, его онкогенность. Это дает возможность выработать правильную стратегию лечения.
Что такое и особенности генотипирования ВПЧ
Генотипирование в классическом понимании – исследование, позволяющее сопоставлять и сравнивать наборы генов различных индивидуумов. Если речь идет о вирусах, этот анализ позволяет выявить штаммы возбудителя.
Папилломавирус является распространенным заболеванием. Основной путь передачи – контактный, при половом сношении, бытовой. Выявлено более 170 разновидностей вируса, 40 из которых поражают человека. Классификация ВПЧ основана на принципе онкогенности. Выделяют штаммы низкого, среднего и высокого риска.
Нуждаетесь в совете опытного врача?
Получите консультацию врача в онлайн-режиме. Задайте свой вопрос прямо сейчас.
Задать бесплатный вопрос
Генотипирование папилломавирусов используют для определения вида вируса. Это позволяет оценить тяжесть заболевания, подобрать тактику лечения пациента, составить прогноз и дать рекомендации по предотвращению рецидива заболевания.
Кроме того, определение штамма ВПЧ при генотипировании поможет врачу дифференцировать заболевание – острый процесс или рецидив – при повторном обращении пациента. Это позволяет корректировать курс лечения.
Заражение новым штаммом, недавнее инфицирование имеет благоприятный прогноз, в течение года велика вероятность спонтанного выздоровления и адекватного отклика на лечение. При хроническом течении заболевания самостоятельное подавление вируса маловероятно и прогноз не оптимистичный. Это показание для дополнительного обследования пациента, выявления факторов, способствующих повторному заражению или активации папилломавируса.
Какие методы диагностики могут определить генотип ВПЧ
Для диагностики папилломатоза показано комплексное обследование пациента. Желательно совместное с партнером. Генотипирование — важный шаг в исследовании.
Методы диагностики в зависимости от половой принадлежности:
- осмотр у гинеколога или дерматолога для женщин, уролога – для мужчин;
- забор отделяемого шейки матки — уретры у мужчин — для исключения ЗППП, воспалительных процессов в репродуктивных органах;
- кольпоскопия – осмотр шейки матки при помощи микроскопа, соскоб ткани слизистой оболочки для цитологического исследования и генотипирования;
- гемотест на антитела к ВПЧ – используется редко, только подтверждает только факт инфицирования. Материалом для исследования является венозная кровь. Не определяется вирусная нагрузка, тип возбудителя, потому что в кровь ВПЧ не попадает ни при каких условиях;
- ПЦР-диагностика – берется материал уретры и шейки матки. Позволяет выявить факт инфицирования, устраняет вопрос ВПЧ типирования, вирусную нагрузку на организм;
- Дайджен-тест – проводится аналогично ПЦР-анализу, определяет 8 онкогенных штаммов ВПЧ. Подтверждается факт заражения с расшифровкой по генотипам, определяется вирусная нагрузка.
Результаты анализа генотипирования — не доказательство супружеской измены, у партнеров реакция иммунитета на инфекцию и скорость самоизлечения различна.
Наличие ВПЧ высокоонкогенного типа не тождественно диагнозу «рак». Это фактор, способствующий развитию участков дисплазии, эрозии шейки матки и их перерождению в злокачественную опухоль.
Таблица онкогенности штаммов папилломавируса
По степени способности индуцировать развитие злокачественного процесса штаммы ВПЧ делят на 3 группы. Их можно определить по генотипированию.
Таблица. Классификация видов папилломавируса по признаку онкогенности.
| Группа штаммов | Номер типа HPV |
| Низкий риск | 3, 6, 11, 13, 32, 34, 40, 41, 42, 43, 44, 51, 61, 72, 73. |
| Средняя степень онкогенности | 30, 35, 45, 52, 53, 56, 58. |
| Высокий канцерогенный риск | 16, 18, 31, 33, 39, 50, 59, 64, 68, 70. |
ПЦР-метод при генотипировании ВПЧ отличается высокой диагностической чувствительностью. Точность теста – до 99%, цитологического исследования – всего 60%.
В 50% случаев рака шейки матки определяется штамм №16, в 10% – 18 подвид.
Инфицирование прочими высокоонкогенными типами папилломавируса диагностируют крайне редко.
Расшифровка расширенного теста с определением количества и типа вируса
Интерпретация результатов анализа — прерогатива врача. Реферетные (колебания в пределах нормы) значения показателей следует уточнять в лаборатории, методики обработки биологического материала могут отличаться в зависимости от оснащенности медицинского центра.
Результаты расширенного теста генотипирования с определением количества и типа вируса включают:
- Если не выявлен, на бланке будет указано – «не обнаружен».
- При положительном результате будут указаны штаммы ВПЧ с расчетом вирусной нагрузки. Единицы измерения – количество фрагментов ДНК на 100 тыс. клеток.
Возможные результаты:
- Lg<3 – присутствует в организме, не является клинически значимым. При отсутствии папиллом лечение не требуется. Медикаментозная терапия не показана. Пациент должен находиться под динамическим наблюдением.
- Lg от 3 до 5 – вирус выявлен, его количество значимо. При наличии кондилом, дисплазии или эрозии шейки матки вероятность перерождения ткани в злокачественную опухоль достаточно высока. Требуется медикаментозное лечение для подавления папилломавируса и деструкция наростов.
- Lg>5 – критически высокий уровень ВКР штамма. Показано комплексное обследование, медикаментозная терапия, деструкция кондилом. После – длительное динамическое наблюдение с контрольными пробами на папилломавирус.
В бланке результата генотипирования указывают специальную единицу – КВМ – это объем биологического материала, взятого для исследования. Для ВПЧ количество клеток эпителия для анализа должно быть более 104 копий на 1 образец. При меньшем значении КВМ количественный тест является недостоверным и требуется повторный забор образцов.
Если же на теле, половых органах присутствуют образования, а результаты анализа отрицательны, то это свидетельствует о следующем:
- Пациент нарушил правила подготовки к исследованию.
- Лаборант не соблюдал методику забора тканей для исследования.
- Произошло самостоятельное исцеление. Образования удаляют любым удобным способом.
В этих случаях рекомендуется провести контрольное взятие проб на генотипирование.
Расшифровка результатов анализа – прерогатива врача. Доктор учитывает анамнез пациента, его статус, наличие хронических заболеваний, форму патологии – острая или рецидивирующая – состояние эпителия шейки матки у женщин.
По совокупности данных исследования генотипирования, симптоматики и цитологического анализа вырабатывают тактику лечения. При высококанцерогенных штаммах медикаментозная терапия проводится у обоих партнеров. Затем показано длительное динамическое наблюдение и периодический мониторинг вирусной активности ВПЧ.
Наличие возбудителя, высокая вирусная нагрузка — не приговор. Требуется качественное лечение. Игнорирование рекомендаций врача будет иметь печальные последствия.
Статья прошла проверку редакцией сайта
Источник
