Чувствительность метода пцр для впч
Автор статьи
Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.
Общие сведения
Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.
Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:
- наличие ВПЧ;
- штаммы, которыми инфицирован больной;
- количественное содержание вируса в организме.
Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.
Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.
Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.
Показания для анализа
Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. 
ВПЧ распространяется следующими путями:
- при незащищенных половых контактах;
- при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
- контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
- во время тесного контакта с кожей больного.
Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу. 
Преимущества метода
ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:
- Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
- Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
- Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
- Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.
Недостатки метода
Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.
Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.
Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:
- собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
- нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
- реагенты были непригодными.
Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.
Виды методик
В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.
Качественный способ
Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.
Генотипирование
Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».
Комбинированный метод
Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.
Количественный метод
Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.
Как сдавать анализ
Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.
Как сдают анализ мужчины
Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.
Как сдают анализ женщины
Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.
Забор биоматериала
Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.
Расшифровка анализа ПЦР
В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.
Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:
- Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
- Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
- Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.
В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.
Источник
В статье рассмотрим, что это такое – ПЦР диагностика? Вирус папилломы человека (ВПЧ) на сегодняшний день является весьма распространенным заболеванием, которое протекает в хронической форме и чревато частыми рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее современная методика диагностики папилломавируса. Данный способ считается очень надежным и помогает выявить не только присутствие этого вируса в человеческом организме, но также его количество и разновидность. Анализ ПЦР на ВПЧ чувствителен даже к неактивным формам вируса, при которых внешние проявления в виде кондилом и папиллом отсутствуют.
На чем основан метод?
Основывается на исследовании ДНК пациента в целях обнаружения в этой цепочке присутствия чужеродных компонентов. Она состоит из четырех нуклеотидов, которые располагаются в определенной последовательности. Если в организм попадает вирус, наблюдается изменение порядка в этой цепочке, что позволяет тщательно отследить деятельность даже самых малозначительных инородных частиц. Методика исследования ПЦР на ВПЧ осуществляется с применением вирусных частиц, что обусловливает скорость деления клеток.
Что определяет исследование?
Данный диагностический принцип позволяет отследить активность ВПЧ не только во время его нахождения в пассивном состоянии, но и в инкубационный период. ПЦР-диагностика определяет:
- наличие в организме ВПЧ;
- штаммы, которыми инфицирован пациент;
- количественное содержание в организме.
Папилломавирусом инфицировано большинство людей, однако сильная иммунная защита подавляет его проявления и не позволяет размножаться. Таким образом, обнаружение ВПЧ качественным способом не всегда может быть оправдано, так как это не рационально в случае, если вирусные частицы в организме присутствуют, но их воздействие настолько минимально, что никак человеку не вредит. Качественный анализ показывает положительный результат, и это зачастую вводит человека в замешательство.
Количественный метод
Поэтому для диагностирования чаще всего применяется количественный метод, который позволяет отследить количество вирусных агентов в организме и установить, насколько опасна их деятельность. Помимо этого, важно установить разновидность штаммов ВПЧ. Они подразделяются по степени онкогенности: одни могут стать основным фактором возникновения онкологических заболеваний, другие же абсолютно безопасны и могут вызывать только некоторые косметические проблемы.
В каждой отдельной ситуации требуется индивидуальный подход, поэтому, прежде чем проходить данное лабораторное исследование, желательно проконсультироваться с квалифицированным специалистом, который подскажет, каким способом и на какие штаммы будет лучше всего провериться с учетом состояния пациента и клинической симптоматики.
Показания к проведению
Наиболее существенным поводом прохождению исследования ПЦР на ВПЧ является наличие на теле бородавок.
Заразиться этим вирусом возможно только от человека. Патогенный микроорганизм после проникновения в кровь начинает размножаться в верхних слоях кожного покрова, что приводит к развитию характерных проявлений – образованию кондилом или папиллом. Поскольку такое заболевание довольно распространено и наблюдается почти у 80% населения, вероятность им заразиться крайне высока. Папилломавирусы передаются посредством:
- незащищенного полового акта;
- во время поцелуя;
- при родах ребенку от мамы;
- бытовым путем;
- при тесном контакте кожи.
Основными показаниями для проведения исследования крови и мазка ПЦР на ВПЧ являются кожные симптомы этого заболевания, которые выглядят как висячие бородавки на нитеобразной тонкой ножке. Даже если подобных кондилом на кожном покрове не наблюдается, вирус может присутствовать в крови все равно, однако течение его будет бессимптомным. Если у пациента обнаруживают папилломавирусные инфекции 18-го и 16-го подтипов, ему рекомендуется регулярно проверяться у таких специалистов как гинеколог и уролог, проходить диагностические процедуры и сдавать анализ на ВПЧ, потому что только благодаря своевременной диагностике имеется возможность предотвратить развитие некоторых онкологических заболеваний.
Виды методик
В рамках проведения диагностики ПЦР на ВПЧ разработаны четыре основных метода тестирования, каждый из которых имеет некоторые особенности проведения и назначается с учетом состояния больного человека. Для выбора наилучшего метода необходима консультация специалиста. Итак, четыре метода:
- Качественный способ, который применяется для того, чтобы опровергнуть или подтвердить факт присутствия в организме вируса. Его основным недостатком является невозможность установить разновидность штамма ВПЧ (только 14-21 типы). Чаще всего качественный метод используется одновременно с другими способами выявления папилломавируса. Результат передается при помощи двух оценок: «не обнаружено» или «обнаружено». То есть данная методика либо констатирует факт присутствия чужой ДНК, либо указывает на ее отсутствие.
- Генотипирование – метод, который способен определить наличие вируса в организме человека и установить его разновидность. Этот способ применяется в случаях, когда нужно установить, осталась ли ДНК вируса после проведенного лечения или наблюдается рецидив в результате повторного нового заражения. Генотипирование помогает оценить эффективность проведенной терапии посредством определения типа ВПЧ. Если этот тот же самый штамм, от которого лечился пациент, значит, лечение прошло безуспешно. Если же анализ показывает наличие другого вида ВПЧ, можно свидетельствовать о повторном заражении.
- Комбинированный метод, который представляет собой узкоспециализированный диагностический способ, основанный на совокупности качественного и определения 16 штамма при помощи генотипирования. Результат может быть представлен 3 ответами: «обнаружен 16 штамм», «не обнаружен» и «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Данный метод используют при подозрении на наличие такого вида папилломавируса, который способен вызывать рак шейки матки у женщин.
- Количественный метод ПЦР на ВПЧ высокого онкогенного риска, который позволяет установить уровень вируса в крови и отследить его развитие. Его считают наиболее информативным, поскольку он позволяет определить тяжесть патологического процесса, исходя из чего подбирается правильное лечение. Методика основана на определении количества клеток вируса в рамках исследуемых 100 тысяч. Если их совокупность выше 5, это говорит о высокой концентрации в организме папилломавируса, что увеличивает вероятность возникновения раковых клеток. Если количество меньше 3, концентрация считается незначительной.
Как подготовиться и сдавать анализ?
На ВПЧ в качестве биоматериала могут взять кровь, однако чаще всего производится забор выделений из уретры у мужчин и шейки матки у женщин.
Специальной подготовки к ПЦР на ВПЧ не требуется. Основное условие заключается в том, чтобы за несколько часов до проведения процедуры не мочиться. Кроме того, желательно не вступать в сексуальные контакты за 2-3 дня до исследования и не принимать алкогольные напитки. При этом не стоит забывать о процедурах интимной гигиены.
У мужчин
У мужчин берется мазок – головка полового органа и мочеиспускательный канал обрабатываются физраствором. Специалист применяет специальную щеточку, которая вставляется в уретру примерно на 4 см. При помощи легкого вращения собирается биологический материал, кладется в пробирку и отправляется в лабораторию для исследования. Хранить его при этом можно не более 2 суток с момента сбора.
У женщин
Взятие мазка для ПЦР анализ на ВПЧ у женщин производится следующим образом: на шейку матки наносится стерильный раствор, затем при помощи щеточки из цервикального канала берется мазок. Приспособление вводят на глубину приблизительно 1 см, после чего врач делает соскоб со стенок канала вращательными движениями. Биологический материал помещается в специальную пробирку, где находится около 15 секунд. В ней специалист обтирает его о стенки, после чего вынимает. Далее содержимое пробирки отправляют на проведение лабораторного исследования.
Правильный забор материала для исследования является залогом успешного осуществления диагностики и получения достоверного результата. Если при этом нарушается стерильность, и в пробирку проникаю чужеродные микроорганизмы, при проведении анализа может произойти распознание вируса, которого на самом деле в организме пациента нет. Ошибка также может случиться из-за небольшого количества материала, взятого для исследования.
Где сдать ПЦР на ВПЧ, интересно многим. Анализы можно сделать в любой медицинской клинике или лаборатории, к примеру, в “Инвитро” или “Гемотесте”.
Преимущества метода
ПЦР является одной из главных методик диагностики и на сегодняшний момент остается наиболее востребованной среди врачей. Это исследование проводится не только в целях выявления ВПЧ, но также позволяет обнаруживать другие патологические микроорганизмы, которые могут передаваться посредством половых контактов. Такой анализ помогает диагностировать скрытые инфекции, гепатиты и т.д. ПЦР тест на ВПЧ имеет ряд преимуществ в сравнении с другими способами выявления заболеваний. Такими преимуществами считаются:
- Высокая специфичность. Анализ помогает с высокой вероятностью отделить следы чужеродных ДНК при изучении собранного биоматериала.
- Высокая производительность. Исследование ПЦР является автоматизированным процессом, помогающим провести изучение непосредственно в день проведения анализа. Такая скорость позволяет человеку не волноваться о результатах на протяжении длительного времени и получить его на руки уже через несколько дней.
- Высокая чувствительность. Тестирование позволяет исследовать деятельность вирусов даже в инкубационный период, когда их концентрации очень малы. Это помогает предупредить возникновение патологического процесса и начать своевременную терапию.
- Возможность проведения сразу нескольких анализов. На основании одного взятого образца крови можно осуществить диагностику для определения сразу нескольких заболеваний. К примеру, одновременно можно выявить возбудителя гонореи и хламидиоза. При этом данная процедура не сможет негативным образом повлиять на достоверность полученного результата.
Недостатки исследования
Несмотря на большую популярность и информативность данного анализа, существуют некоторые негативные моменты ПЦР диагностики на ВПЧ. Главным из них является вероятность получения ложноположительных результатов. Такое происходит в случае, когда терапия уже проведена, инфекция уничтожена, но мертвые клетки вирусов еще остаются в тканях организма. Для обновления клеток требуется некоторое время. Если провести исследование раньше 2-3 месяцев после лечения, ПЦР может показывать положительный результат. Методика не замечает никаких отличий, поскольку она нацелена на поиск вирусной ДНК, которую может находить даже в уже погибших клетках. Это способствует получению ложноположительных результатов. Избежать подобной ситуации можно, если проводить лабораторное исследование в установленные лечащим врачом сроки.
Расшифровка
Что покажет расшифровка ПЦР на ВПЧ?
Интерпретировать результаты анализов должен врач. Но пациенту тоже важно знать о структуре бланка результатов. Если в анализе указано «ДНК не обнаружено», значит папилломавирус в крови отсутствует. Если показатель Lg 5 и больше, это свидетельствует о его высокой концентрации в крови, Lg 3−5 — о значимом количестве, менее 3-х — о незначительном.
Ложноотрицательный анализ
Кроме того, может наблюдаться ложноотрицательный анализ. Он возникает если:
- собранный биологический материал неправильно хранился или транспортировался;
- были нарушены условия стерильности, и в полученную кровь пациента попали другие микроорганизмы;
- вследствие непригодности реагентов.
Чтобы исключить вероятность получения ложноотрицательных результатов, необходимо подбирать для проведения данного анализа проверенную лабораторию с высококвалифицированным персоналом.
Мы подробно рассмотрели, как и для чего проводится ПЦР-диагностика. Что это такое, теперь понятно.
Источник
