Что такое иммунофенотип меланомы
Меланома — одна из самых агрессивных и опасных опухолей. Она рано распространяется на близлежащие лимфатические узлы и дает метастазы в различные органы.
Распространенность меланомы постоянно растет во всем мире, в том числе и в России. Еще совсем недавно наличие метастазов и невозможность удалить опухоль хирургическим путем означали для больного неминуемую смерть.
В последние годы появились новые эффективные препараты, которые помогают увеличить выживаемость пациентов с меланомой на поздней стадии. Одно из наиболее перспективных современных направлений — иммунотерапия.
Клетки с поврежденными генами, способные давать рост злокачественной опухоли, постоянно образуются в организме любого человека. Но иммунная система вовремя находит и уничтожает их. Когда количество переродившихся клеток достигает определенной критической величины, защитные механизмы перестают адекватно работать. Иммунные клетки не реагируют на опухоль, не атакуют её.
Задача иммунотерапии — активировать иммунную систему, снять имеющиеся блоки, запустить процесс распознавания и уничтожения опухолевых клеток. Сегодня для этого используются моноклональные антитела — вещества, которые воспринимают определенные молекулы в качестве антигенов, связываются с ними, тем самым активируя иммунные клетки. Названия всех таких препаратов имеют окончание «-маб» (от англ. monoclonal antibody — «моноклональное антитело»):
- Кейтруда – Пембролизумаб
- Опдиво – Ниволумаб
- Ервой – Ипилимумаб
- Зелбораф – Вемурафениб
- Тафинлар – Дабрафениб
Также эффективными средствами для борьбы с меланомой на поздних стадиях являются ингибиторы BRAF — белка, который образуется в результате мутации в одноименном гене и запускает процесс бесконтрольного размножения клеток. Поговорим о каждом из этих препаратов подробнее.
Кейтруда
Кейтруда (другие названия: Пембролизумаб, MK-3475) — инновационный препарат, который был одобрен FDA (Американским управлением по надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) в сентябре 2014 года, и в настоящее время уже достаточно широко применяется для лечения меланомы на поздних стадиях.
В 2014 году Кейтруда получила статус «приоритетное рассмотрение» и «прорыв в медицине». Это означает, что Пембролизумаб был включен в группу лекарственных средств, способных повысить эффективность и безопасность лечения редких и серьезных заболеваний. Именно поэтому препарат был так быстро одобрен и внедрен в клиническую практику. Обычно это происходит намного дольше.
Как действует Кейтруда?
Препараты для иммунотерапии меланомы и других злокачественных опухолей существуют уже достаточно давно. Но они всегда имели низкую эффективность, и до недавнего времени ученые не знали, как справиться с этой проблемой.
Задача иммунотерапии — активировать иммунную систему больного, заставить её атаковать и уничтожать раковые клетки. Долгое время препятствием для достижения этой цели становился белок PD-1. Это иммуноглобулин, молекулы которого встроены в клеточные мембраны. Он играет роль в дифференцировке иммунных клеток.
Белок PD-1 блокирует работу иммунной системы. Он не дает Т-лимфоцитам распознавать и уничтожать раковые клетки.
Кейтруда содержит моноклональные антитела, которые блокируют PD-1. Препарат помогает убрать «тормоз», благодаря чему лимфоциты приобретают способность атаковать опухолевую ткань.
Когда применяется этот препарат?
Показания к применению Кейтруды:
- метастазирующая меланома на поздних стадиях;
- неоперабельная меланома;
- отсутствие эффекта от лечения другими препаратами.
Насколько эффективна Кейтруда?
В Калифорнийском Университете в Лос-Анджелесе было проведено исследование, в котором приняли участие 173 человека с диагностированной прогрессирующей меланомой. Их разделили на две группы. В одной из них пациенты получали стандартную дозу препарата 2 мг на килограмм массы тела через каждые 3 недели. Во второй группе доза была увеличена в 5 раз (10 мг/кг).
У 24% пациентов, получавших препарат в дозе 2 мг/кг, опухоль уменьшилась более чем на треть. Повторный рост меланомы не отмечался, а эффект препарата сохранялся от 1,4 до 8,5 месяцев (в отдельных случаях — дольше).
Безопасна ли Кейтруда?
Второе исследование было проведено с участием 411 пациентов, которые имели прогрессирующую меланому и принимали Кейтруду. При этом тяжелые побочные эффекты со стороны кишечника, легких и печени отмечались редко.
Чаще всего у больных возникали такие побочные эффекты, как повышенная утомляемость, кашель, тошнота, сыпь, кожный зуд, снижение аппетита, запор, диарея, боли в суставах (источник данных об исследованиях — https://www.medicalnewstoday.com/articles/282101.php).
Опдиво
Опдиво (другое название — Ниволумаб) — препарат из группы моноклональных антител, одобренный FDA в конце декабря 2014 года.
В 2014 году этот препарат получил статусы: «принципиально новое лекарственное средство», «орфанный препарат», «ускоренное рассмотрение». Ниволумаб, так же, как и Кейтруда, был одобрен по ускоренной процедуре.
Как работает Опдиво?
По механизму действия препарат представляет собой аналог Кейтруды. Он блокирует рецептор PD-1, который снижает активность Т-лимфоцитов, не дает им распознавать и атаковать иммунные клетки.
В каких случаях планируется применять Ниволумаб?
Показания к применению препарата:
- прогрессирующая неоперабельная меланома;
- отсутствие эффекта от лечения Ипилимумабом;
- меланома, при которой имеется мутация гена BRAF, но применение ингибиторов BRAF не приносит эффекта.
Насколько эффективен Ниволумаб?
Эффективность Опдиво была изучена во время исследования, в котором приняли участие 120 больных с неоперабельной метастатической меланомой. В ходе применения препарата у 32% пациентов отмечалось существенное уменьшение размеров опухоли. Эффект сохранялся в течение 6 месяцев.
Безопасность
Также было проведено исследование, во время которого оценивалась безопасность препарата. 268 больных получали Ниволумаб, 120 — классическую химиотерапию.
Наиболее распространенные побочные эффекты, отмечавшиеся у больных, принимавших Опдиво: зуд, кожная сыпь, инфекции верхних дыхательных путей, кашель, задержка жидкости в организме (отеки).
Редко отмечаются тяжелые нарушения со стороны легких, толстой кишки, печени, почек и желез внутренней секреции. Эти побочные эффекты связаны с действием препарата на иммунитет (источник данных об исследованиях — https://www.medicalnewstoday.com/releases/287399.php).
Ервой
Ервой (другие названия — Ипилимумаб, MDX-010, MDX-101) — препарат для лечения меланомы на поздних стадиях, одобренный FDA в марте 2011 года.
Ипилимумаб в настоящее время широко применяется для лечения метастазирующих и неоперабельных меланом на поздней стадии.
Как действует Ервой?
Как и другие препараты из группы моноклональных антител, Ипилимумаб действует не на саму опухоль, а на иммунную систему. Организм начинает самостоятельно уничтожать переродившиеся раковые клетки.
На поверхности иммунных клеток, — Т-лимфоцитов, — находится особый рецептор CTLA-4. Ипилимумаб, являясь антителом, воспринимает этот рецептор как антиген и присоединяется к нему, тем самым активируя лимфоцит.
При применении Ервоя пятилетняя выживаемость больных достигает 16%. Препарат обладает эффективностью 80% и более: это проявляется в уменьшении размеров метастазов, снижении раковой интоксикации, повышении качества жизни. Ервой дает более медленный эффект, чем Зелбораф и другие ингибиторы BRAF (см. ниже). Но он действует более продолжительно.
В большинстве случаев препарат переносится пациентами хорошо. Возможны побочные эффекты, такие как: общее недомогание, высыпания на коже, жидкий стул.
Редко встречаются более тяжелые поражения кожи, слизистых оболочек, печени, периферических нервов, эндокринных желез
Зелбораф
Зелбораф (Вемурафениб) — препарат из группы ингибиторов BRAF, применяемый для иммунотерапии метастазирующей меланомы на поздних стадиях. Он был одобрен FDA в августе 2011 года, а Европейским агентством лекарственных средств — в 2012 году.
Механизм действия. Что такое ингибиторы BRAF?
Зелбораф стал первым препаратом для лечения меланомы из группы ингибиторов BRAF.
BRAF — ген, который кодирует одноименный белок-фермент. Он обеспечивает размножение клеток под контролем гормонов и факторов роста.
В результате мутации гена BRAF происходят нарушения:
- избыточное деление клеток;
- ошибочная устойчивость клеток к апоптозу — запрограммированной естественной гибели.
Это приводит к возникновению раковой опухоли. Вемурафениб блокирует белок BRAF. Препарат действует очень быстро: после начала приема таблеток размеры опухоли обычно существенно уменьшаются в течение месяца. Одновременно нормализуется состояние больного, уменьшается раковая интоксикация.
Показания к применению
Зелбораф применяется для лечения меланомы на поздних стадиях. Препарат эффективен только в том случае, если у больного имеется мутация гена BRAF. Если же в клетках меланомы этот ген нормален, то препарат может, напротив, ускорить рост опухоли.
Поэтому перед назначением Вемурафениба всегда проводится молекулярно-генетическое исследование. Сегодня FDA одобрен инновационный тест THxID BRAF Kit, разработанный компанией bioMérieux.
Дабрафениб
Дабрафениб (Тафинлар) — новый препарат для иммунотерапии меланомы на поздней стадии, относящийся к группе ингибиторов белка BRAF. Он был одобрен FDA в 2014 году.
Как действует Тафинлар?
Дабрафениб, как и Зелбораф, блокирует белок, который образуется в результате мутации гена BRAF.
Согласно статистике, около 50% всех больных меланомой на поздних стадиях имеют мутацию этого гена. Её распространенность зависит от расположения опухоли:
- больные с меланомой на коже имеют мутацию более чем в 50% случаев;
- меланома слизистых оболочек содержит мутировавшие клетки в 5% случаев;
- меланома глаза никогда не сопровождается такой мутацией.
Когда применяется Дабрафениб?
Показания к применению препарата:
- метастазирующая меланома на поздних стадиях;
- неоперабельная меланома.
При применении Дабрафениба не назначаются другие виды лечения меланомы, такие как иммунотерапия, лучевая терапия, химиотерапия.
В 2012 году в журнале «Ланцет», — одном из самых авторитетных медицинских изданий, — были опубликованы результаты сравнения эффективности Дабрафениба и Дакарбазина — препарата, который наиболее часто используется для лечения меланомы. Выживаемость пациентов, принимавших Дабрафениб, оказалась существенно выше.
В 2014 году ученые опубликовали обновленные результаты исследования. В течение 2-х лет выживаемость пациентов, принимавших Дабрафениб, составила 45%, а тех, кто получал Дакарбазин — 32%.
Чаще всего при приеме Дабрафениба отмечаются такие побочные эффекты, как утолщение кожи (гиперкератоз), лихорадка, головная боль, боли в суставах, потеря слуха, папилломы кожи. Наиболее тяжелые возможные побочные эффекты, которые встречаются редко: падение артериального давления, тяжелые ознобы, обезвоживание, тяжелые нарушения функции почек, повышение уровня сахара крови. Перед назначением препарата всегда проводят исследование, которое помогает убедиться, что у больного имеется мутация гена BRAF. Широко применяется тест THxID BRAF Kit.
Европейская онкологическая клиника сотрудничает с израильскими, европейскими и американскими врачами, которые накопили значительный опыт в лечении иммунопрепаратами последнего поколения.
Иммунотерапия интерфероном при меланоме
Интерферон-альфа и интерлейкин-2 (ИЛ-2) — препараты, которые относятся к классу цитокинов, веществ, которые стимулируют иммунную систему. Их вводят внутривенно или под кожу. Цитокины могут быть назначены в двух случаях:
- При меланоме IV стадии. Интерферон и интерлейкин могут уменьшать размеры опухоли примерно на 10–20%. Их можно сочетать с химиопрепаратами.
- В качестве адъювантной терапии после операции. Цитокины применяют при меланомах, которые прорастают достаточно глубоко в кожу, в результате чего после хирургического лечения повышен риск рецидива. Интерферон-альфа и ИЛ-2 помогают предотвращать рецидивирование, но пока нет доказательств того, что они повышают выживаемость.
Во время лечения могут возникать такие побочные эффекты, как лихорадка, боли, озноб, депрессия, повышенная утомляемость. Иногда нарушаются функции печени и сердца.
Преимущества иммунотерапии при меланоме перед классической химиотерапией
Пожалуй, главное преимущество иммунотерапии перед «классической тройкой» лечения рака — химиотерапией, хирургией и лучевой терапией — в том, что она действует более физиологично. В то время как классические методы лечения нарушают и подавляют естественную иммунную защиту, иммунотерапия, напротив, активирует её.
Еще одно преимущество иммунотерапии в том, что она обладает так называемым «эффектом памяти». За счет этого лечебные эффекты в организме сохраняются в течение длительного времени после того, как завершен курс лечения. Это способствует повышению выживаемости.
Методы, которые применяются в иммунотерапии, в отличие от химиопрепаратов, не атакуют здоровые клетки. Благодаря этому побочных эффектов обычно меньше, они не такие серьезные. Как правило, с ними удается легче справиться с помощью поддерживающей терапии.
Наконец, иммунотерапия, открывает большие перспективы в лечении онкозаболеваний на будущее. Иммунитет человека, его взаимодействия с раковыми клетками — область науки, в которой остается большой простор для исследований, еще предстоит узнать много нового. Ученые и врачи не теряют надежду, что, возможно, в один прекрасный день это поможет кардинально изменить подходы к лечению рака, создать более эффективные методы и спасать больше жизней.
Отзывы об иммунотерапии при меланоме в Европейской клинике
Мне удаляли родинку в салоне. Это не первая родинка которую я удаляла, так что волноваться было вроде не о чем. А оказалось, что это меланома. Точнее не известно, была ли меланомой сама родинка, но эта процедура (криодеструкция) её как бы разбудила. В клинике, конечно, мне рассказали, какое «умное» решение я тогда приняла, но ничего не поделаешь. Хуже всего то, что самой отделённой родинки не осталось — она же была разрушена. Это на заметку хозяйкам, которые доверяют такие процедуры косметологам. Никогда так не делайте.
Показать полностью »
Только больница. Там эту родинку отправят на исследование и скажут о ней всё. Так вот, лечить мне хотели химией. То есть не то, что хотели, а доктор сказала, что точно надо будет проводить химиотерапию. На всякий случай я обратилась в частную клинику, и там мне прямо с порога сказали, что никакой химиотерапии делать нельзя. Она работает только в 10% случаев, а ущерба для организма в десять раз больше чем пользы. Теперь есть препараты иммунотерапии. Это когда организм и сам может справиться, только ему надо помочь. Они есть ещё не во всех больницах, поэтому в предыдущей мне и назначали химию. Но это, что называется, по-старинке. А вот на иммунотерапию я согласилась и приняла решение лечиться здесь. И не зря, как видите. Чувствую себя прекрасно. Само лечение было не сказать чтобы тяжёлым — мне удалили участок кожи, с которого я удаляла родинку (сейчас под лопаткой просто очень светлое пятно с такой тонкой кожей на фоне моего многолетнего загара). А потом препарат. Результат, чтоб не сглазить, наилучший. По последним анализам, болезнь ушла. А вот загорать и кое-что есть мне всё ещё нельзя. Да уже как-то и не хочется, после таких приключений. Не думаю о том, что случилось бы, если бы не эти великие доктора. И никому не советую много думать — просто ищите решения и они найдутся.
Запись
на консультацию
круглосуточно
Источник
Меланома считается «антигенной опухолью», экспрессирующей опухолеассоциированные антигены.
Среди них довольно хорошо изученные – это группа дифференцировочных антигенов – родословно-специфические антигены, экспрессирующиеся как в опухолевых клетках, так и в нормальных клетках на определенных этапах развития.
При этом в опухолевых клетках экспрессия дифференцировочных антигенов обычно повышается.
При меланоме они экспрессируются на протяжении всех стадий опухолевой прогрессии от меланоцитов до меланомных клеток.
Большинство дифференцировочных антигенов вовлечены в процесс синтеза меланина. Некоторые меланомодифференцировочные антигены узнаются Т-клетками иммунной системы, например, тирозиназа (TYR), gp100 (SILV), MART-1 (MLANA) и TRP-1 (TYRP1).
Экспрессия различных опухолевых маркеров
К опухолеассоциированным антигенам также относится группа раково-тестикулярных генов. С иммунологической точки зрения раково-тестикулярного антигена (РТА) могут быть хорошими мишенями для иммунотерапии опухолей, поскольку в нормальных тканях эта группа антигенов не экспрессируется (за исключением ткани яичек, которые недоступны для клеток иммунной системы из-за отсутствия их прямого контакта с иммунокомпетентными клетками и отсутствия на них экспрессии антигенов HLA I класса).
В отличие от РТА, иммуногенность дифференцировочных антигенов меланоцитов невысока из-за иммунологической толерантности к этим “своим” антигенам, за исключением гена MLANA, антиген которого содержит несколько эпитопов для узнавания цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и способен индуцировать генерацию меланомо-специфичных ЦТЛ.
Таким образом, экспрессия различных опухолевых маркеров играет одну из ключевых ролей в индукции противоопухолевого иммунитета.
С помощью методов иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР)полученные нами клеточные линии исследованы на различные группы антигенов. Раково-тестикулярные антигены исследованы в реакции ПЦР. Антигены гистосовместимости определены с помощью моноклональных антител в реакции ИФА. Дифференцировочные меланомные маркеры исследованы с помощью моноклональных антител (МКА) (табл. 3.1).
Таблица 3.1. Дифференцировочные меланомные антигены, РТА и антиген (АГ) гистосовместимости
Дифференцировочные меланомные маркеры, определяющие отношение данной линии к меланоме, исследованы с помощью МКА CD63, HMB45, MelanA, Tyrosinase, HMW. Иммуноцитохимическое исследование проведено на 19 клеточных линиях меланомы.
Для дальнейшей характеристики клеток были приготовлены цитологические препараты. Экспрессию всех исследованных маркеров наблюдали в цитоплазме клеток с различной интенсивностью окрашивания.
Отсутствие окрашивания и слабое окрашивание принимали за негативную реакцию, окрашивание со средней и сильной интенсивностью – за положительную реакцию.
Экспрессию CD63 наблюдали во всех исследованных образцах (100%), MelanA/MART1 и тиразиназе в 7 из 19 образцов, HMB45 -в 11 из 19 образцов (табл. 3.2).
Таблица 3.2. Экспрессия дифференцировочных антигенов
С помощью проточно-цитометрического анализа определен иммунофенотип клеток меланомы. На поверхности всех клеток, культивируемых клеточных линий, отсутствовали лимфоидные маркеры Т- и В-лимфоцитов (CD3 и CD20; табл. 3.3).
Таблица 3.3. Иммунологический фенотип культивируемых клеточных линий
Все 19 клеточных линий, за исключением mel Kor экспрессировали антиген гистосовместимости первого класса (HLA-ABC). В 13 из 19 случаев отмечена экспрессия антигена гистосовместимости второго класса (14,3-97,8% антигенположительных клеток). При этом линия mel Kor, не имеющая антигена гистосовместимости первого класса, также не имела антиген гистосовместимости второго класса.
Экспрессия CD86 была оценена в 19 образцах (табл. 3.4), при этом положительная реакция отмечена лишь в одном (линия mel P) случае.
Экспрессия CD80 была оценена в 19 образцах (табл. 3.4), при этом положительная реакция отмечена в 9 случаях (10-24,4% антигенположительных клеток).
Клеточная линия mel P экспрессировала обе молекулы, CD86 и CD80. Все исследованные клеточные линии экспрессировали на своей поверхности антиген CD54, молекулу адгезии ICAM-1, лиганд для LFA-1 и МАС-1, табл. 3.4.
Таблица 3.4. Иммунологический фенотип культивируемых клеточных линий
При использовании МКА ICO218 к меланомаассоциированному антигену (HMW), полученному в НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина, положительная экспрессия HMW выявлена в 10 из 14 (71,4%) образцов клеточных линий (табл. 3.4.).
Методом иммунофлюоресценции на клеточных линиях mel Mtp, mel Il, mel Ras, mel P, mel Is, mel Kor, mel Cher, mel Ibr исследована экспрессия белков, контролирующих апоптоз в клетке, одни из которых индуцируют программированную клеточную гибель, а другие ингибируют её: белки семейства bcl-2 и антиген CD95, (рис. 3.1).
Рис. 3.1. Экспрессия CD95 на клеточных линиях меланомы
Маркер апоптоза антиген CD95 экспрессируется на всех восьми исследованных клеточных линиях меланом, кроме одной, mel Mtp.
Экспрессия bcl-2 и bax на различных клеточных линиях варьирует от 12,0±1,4% до 39,1±0,9% и от 23,4±1,1% до 94,4±2,6% соответственно; с наименьшей экспрессией на клеточной линии mel Mtp (белок bcl-2 – 1,7±0,2%, проапоптотический bax – 18,5±0,5%) (рис. 3.2).
Рис. 3.2. Экспрессия bcl-2 и bax на клеточных линиях меланомы
Исследование экспрессии генов на клеточных линиях выполнено с помощью ПЦР. Показано, что наиболее распространенным является ген S100b, который экспрессирован в 18 из 19 (95%) линий клеток. Реже встречается экспрессия гена SILV – в 16 из 19 (84%) линий клеток, гена TYR – в 15 из 19 линий клеток (79%) и гена MLAN – в 14 из 19 линий клеток (74%). Раково-тестикулярные гены экспрессированы более неоднородно: MAGE A2 выявлен на 18 из 19 линий клеток (95%), а MAGE В2 – только в 7 случаях (37%).
Экспрессию антигенов гистосовместимости I (HLA-A, B, C) и II (HLA-DR) класса смотрели в динамике на 10, 20 и > 30 пассажей (табл. 3.5). Только на одной из 19 клеточных линий при исследовании десятого пассажа отсутствовал антиген гистосовместимости первого класса (mel Kor).
На этой линии также отсутствовал антиген гистосовместимости второго класса, что выявлялось и при исследовании последующих пассажей.
Таблица 3.5. Изменения экспрессии антигенов гистосовместимости I (HLA-A, B, C) и II (HLA-DR) классов в динамике
Количество АГ+ клеток HLA-A, B, C на 10 пассаже всех клеточных линиях колебалось от 43 до 99,3%. После длительного культивирования (20 и 25 пассажи) экспрессия антигена HLA-A, B, С только в одном случае значительно снизилась (от 93,3 к 31,7%).
Исследование экспрессии антигенов гистосовместимости второго класса выявило в одних случаях полное их отсутствие на протяжении всех пассажей, а в других – тенденцию к увеличению. Количество антигенположительных клеток антигена гистосовместимости второго класса (HLA-DR) на 10 пассаже определялось на четырех линиях и составило от 10,1 до 42,9%. К 20 пассажу уже 12 клеточных линий имели повышенный уровень экспрессии HLA-DR (от 16,5 до 78,2% АГ+ клеток), а к 30 пассажу 13 линий имели повышенную экспрессию HLA-DR (от 14,3 до 96% АГ+ клеток).
Методом проточной цитометрии проанализировано наличие белка HLA-E и суммарного HLA-ABC на клеточной поверхности mel Il, mel P, mel Cher, mel Ibr, mel Mtp, mel R, mel Kor с использованием МКА.
Полученные данные позволили разделить тестируемые линии на 3 категории.
К первой относится линия, которая имеет на своей поверхности молекулы как МНС Ia класса, так и HLA-E – mel Si.
Ко второй, и наиболее многочисленной, относятся линии, экспрессирующие исключительно классические молекулы MHC (HLA-A, -B, -C) – mel Il, mel P, mel Cher, mel Ibr, mel Mtp, mel E, mel R.
Единственной меланомной линией, на которой не было детектировано ни одной молекулы-представителя первого класса комплекса гистосовместимости была mel Kor.
Этот результат вполне объясним, так как клетки mel Kor не содержат мРНК в2-микроглобулина, без которого не происходит сборки молекул HLA. Несмотря на высокий уровень белка HLA-E по данным вестерн-блот анализа в клеточной линии mel Il, отмечено отсутствие HLA-E на этих клетках.
Возможно существование аллельных вариаций в лидерных пептидах молекул МНС Ia класса в исследуемых линиях, которые бы приводили к образованию неправильных, т. е. неспособных к связыванию с HLA-E, пептидов. Не обнаружено клеточных линий, в которых наблюдалось бы одновременное снижение уровня молекул МНС Ia класса на фоне увеличения белка HLA-E на поверхности.
Возможно это связано с тем, что во время иммунного ответа клетки опухоли находятся под воздействием многих факторов, и, в первую очередь, под воздействием цитокинов. Так, большинство процессов клеточной цитотоксичности сопровождается секрецией интерферона-гамма (INF-y). Что касается гена HLA-E, его мРНК присутствовала во всех исследуемых клеточных линиях в количестве сравнимом, а иногда даже превышающем, суммарный уровень экспрессии генов тяжелых цепей классических HLA-A, -B и -C.
Таким образом, транскрипт молекулы HLA-E не только был обнаружен во всех исследуемых меланомных линиях, но и присутствует в клетках в достаточном количестве для синтеза белкового продукта постоянным воздействием этого цитокина к связыванию с HLA-E, пептидов».
Исследование HLA-фенотипа клеточных линий I класса
Исследование трансплантационного иммунитета (HLA-фенотипа I класса гистосовместимости) 19 клеточных линий выявило присутствие на клетках различных антигенов HLA, что также способствует определению рестриктивности генов, в зависимости от HLA-фенотипа (табл. 3.6).
Таблица 3.6. HLA-фенотип I класса гистосовместимости клеточных линий
Самые часто встречаемые гены:
– А26(10) – выявлен на 6 линиях;
– HLA3 – на 6 линиях;
– HLA2 и HLA23 на 5 линиях.
Остальной фенотип отмечен менее чем на 4 линиях.
Меланома характеризуется высокой способностью к метастазированию. При этом активируются те же внутриклеточные программы, которые контролируют процессы эмбрионального развития.
Считается, что одним из основных сигнальных каскадов, нарушения в регуляции которых приводят к формированию и развитию меланомы, является сигнальный путь Wnt, который включает в себя сложную сеть внутриклеточных взаимодействий. Его лиганды способны запускать как минимум три различные цепи передачи сигнала: каноническую и две неканонические.
Каноническая ветвь сигнального пути Wnt задействована в контроле пролиферации и дифференцировки клеток. Неканонические сигнальные пути Wnt, напротив, как правило, влияют на организацию цитоскелета и клеточную подвижность. На настоящий момент предполагают, что канонический и неканонические сигнальные каскады Wnt воздействуют на разные этапы развития опухоли. Канонический сигнальный путь Wnt участвует в формировании меланомы, в то время как неканонические ветви пути передачи сигнала от белков Wnt вовлечены в метастазирование.
В диссертации Куликовой К. В. «Влияние WNT лигандов на формирование фенотипа клеточных линий меланомы человека» исследованы следующие клеточные линии: mel R, mel G, mel Me, mel Ksen, mel Ibr, mel Il, mel Kor, mel P, mel Si. Для всех этих клеточных линий характерна экспрессия генов маркеров эпителиально-мезенхимального перехода: Slug, Twist1, Sip1, виментина, что свидетельствует об активированном статусе программы эпителиально-мезенхимального перехода в изученных линиях. Показано, что накопление Р-катенина в ядрах клеток линий меланомы человека не может служить достаточным условием для активации канонического Wnt сигнального пути.
Канонический лиганд Wnt3a в модельной клеточной линии меланомы человека способен активировать два Wnt-сигнальных каскада: канонический Р-катениновый и неканонический Wnt/Ca-зависимый. Этот лиганд блокирует пролиферацию опухолевых клеток и стимулирует их подвижность. Неканонические лиганды Wnt5a и Wnt11 также способны активировать Wnt/Ca-зависимый сигнальный путь в модельной клеточной линии меланомы человека.
При этом Wnt5a влияет на миграционную способность клеток, a Wnt1 l способствует пролиферации. Как канонический Wnt3a, так и не канонический Wnt5a-лиганды усиливают подвижность клеток линии меланомы человека mel P. Неканонический лиганд Wnt11 усиливает пролиферацию культуры клеточной линии меланомы человека mel P, в то время как канонический лиганд Wnt3a оказывает противоположное действие. В клеточной линии меланомы человека mel P канонический лиганд Wnt3a способен активировать сигнальный путь, связанный с увеличением уровня внутриклеточного кальция.
И.Н. Михайлова, М.М. Давыдов
Опубликовал Константин Моканов
Источник
